[发明专利]一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法在审
| 申请号： | 201711483650.6 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108300687A | 公开（公告）日： | 2018-07-20 |
| 发明（设计）人： | 黄锋;桂滢;陈务贤;吴菁;罗祖纯 | 申请（专利权）人： | 广西医科大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 深圳新创友知识产权代理有限公司 44223 | 代理人： | 梁月钊 |
| 地址： | 530021 广*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，包括如下步骤：(1)HK‑2细胞复苏；(2)细胞传代培养；(3)显微镜下观察培养期细胞形态，当细胞边缘皱缩变圆，折光性增强时，离心，加入完全培养基制成细胞重悬液；(4)将细胞重悬液转接入完全培养基中，接种密度为40％～50％，培养；(5)当细胞生长密度达80％～90％时，进行离心，加入完全培养基制成细胞重悬液(细胞浓度为1.0～1.5*106个/ml)；(6)将制成的细胞重悬液，按每40～60ul接种至2ml的完全培养基中，进行培养40～50h，换无血清培养基培养4～8h，然后加入浓度为45～55mgI/ml的碘克沙醇溶液，继续培养5～7h后得到损伤模型细胞。本发明能够培养出与造影剂肾病患者术后血清HMGB‑1含量类似、损伤更接近、体系毒素更少的细胞损伤模型。 | ||
| 搜索关键词： | 完全培养基 细胞重悬液 损伤模型 肾小管上皮细胞 造影剂 接种 无血清培养基 细胞损伤模型 造影剂肾病 细胞 碘克沙醇 细胞边缘 细胞传代 细胞复苏 细胞生长 细胞形态 培养期 折光性 血清 毒素 术后 皱缩 显微镜 损伤 观察 | ||
【主权项】：
1.一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)HK‑2细胞复苏；(2)将复苏后的HK‑2细胞在完全培养基内进行传代培养；(3)显微镜下观察培养期的细胞形态，当细胞边缘皱缩变圆，折光性增强时，将培养液在900～1100rmp下离心4～6min，弃去上清液，加入完全培养基制成细胞重悬液；(4)将第(3)步骤中的细胞重悬液转接入新鲜完全培养基中，置于培养箱中培养；(5)当细胞生长密度达80％～90％时，将细胞培养液在900～1100rmp下离心4～6min，加入完全培养基制成细胞重悬液(细胞浓度为1.0～1.9*106个/ml)；(6)将步骤(5)制成的细胞重悬液，按每40～60ul接种至2ml的新鲜完全培养基中，进行培养40～50h，换无血清培养基培养4～8h，然后加入浓度为45～55mgI/ml的碘克沙醇溶液，继续培养5～7h后得到损伤模型细胞。
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