[发明专利]一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法

权利要求书

1.一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)HK-2细胞复苏；

(2)将复苏后的HK-2细胞在完全培养基内进行传代培养；

(3)显微镜下观察培养期的细胞形态，当细胞边缘皱缩变圆，折光性增强时，将培养液在900～1100rmp下离心4～6min，弃去上清液，加入完全培养基制成细胞重悬液；

(4)将第(3)步骤中的细胞重悬液转接入新鲜完全培养基中，置于培养箱中培养；

(5)当细胞生长密度达80％～90％时，将细胞培养液在900～1100rmp下离心4～6min，加入完全培养基制成细胞重悬液(细胞浓度为1.0～1.9*10⁶个/ml)；

(6)将步骤(5)制成的细胞重悬液，按每40～60ul接种至2ml的新鲜完全培养基中，进行培养40～50h，换无血清培养基培养4～8h，然后加入浓度为45～55mgI/ml的碘克沙醇溶液，继续培养5～7h后得到损伤模型细胞。

2.根据权利要求1所述的一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，所述完全培养基为按10％FBS、1％双抗的比例配置。

3.根据权利要求1所述的一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，所述第(4)步骤，将第(3)步骤中的细胞重悬液转接入新鲜完全培养基中时，其接种的密度为40％～50％。

4.根据权利要求1所述的一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，所述第(3)和第(5)步骤中的离心速度为1000rmp，时间为5min。

5.根据权利要求1所述的一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，所述第(5)步骤，制成的所述细胞重悬液其细胞浓度为1.875*10⁶个/ml或1.475*10⁶个/ml或1.125*10⁶个/ml或1.7*10⁶个/ml。

6.根据权利要求1所述的一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，所述第(6)步骤，将第(5)步骤制成的细胞重悬液，按每50ul接种至2ml的新鲜完全培养基中，进行培养48h，换无血清培养基培养6h。

7.根据权利要求1所述的一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，所述第(6)步骤，加入的碘克沙醇溶液浓度为50mgI/ml。

8.根据权利要求1所述的一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，所述第(6)步骤，加入碘克沙醇溶液后，继续培养6h后得到损伤模型细胞。

9.根据权利要求1所述的一种基于肾小管上皮细胞培养造影剂损伤模型的方法，其特征在于，所述第(1)～(6)步骤中涉及到的细胞培养，培养条件为37℃、5％CO₂浓度培养箱中培养。