[发明专利]稳定呼吸道合胞病毒融合蛋白的方法

摘要

本申请涉及稳定呼吸道合胞病毒(RSV)的融合蛋白的方法。具体而言，本申请涉及一种灭活RSV且稳定所述RSV中的pre‑F蛋白的方法，以及通过该方法获得的经灭活的RSV病毒。此外，本申请还涉及一种制备含有pre‑F蛋白的免疫原性组合物的方法，以及通过所述方法获得的免疫原性组合物。本申请还涉及，所述经灭活的RSV病毒和所述免疫原性组合物的用途。

主权项

1.一种灭活呼吸道合胞病毒(RSV)且稳定所述RSV病毒中的pre‑F蛋白的方法，其包括以下步骤：(1)提供包含活的RSV病毒的宿主细胞；(2)使用选自下列的固定剂对所述包含活的RSV病毒的宿主细胞进行固定和灭活：甲醇溶液，甲醛溶液，和多聚甲醛溶液；其中，甲醇的浓度按重量计为0.3125％‑5％(w/w)；甲醛的浓度按重量计为0.0069％‑0.1185％(w/w)；多聚甲醛的浓度按重量计为0.0173％‑1％(w/w)；和(3)从步骤(2)的产物中去除所述固定剂，从而获得灭活的RSV病毒；优选地，在步骤(1)中，通过下述步骤来提供活的RSV病毒：(1a)用RSV病毒感染宿主细胞；(1b)在允许RSV病毒增殖的条件下，培养步骤(1a)获得的经感染的宿主细胞；和(1c)收集步骤(1b)获得的经培养的宿主细胞，其包含活的RSV病毒；优选地，在步骤(1c)中，在收集所述经培养的宿主细胞之前，对所述经培养的宿主细胞进行洗涤；优选地，所述宿主细胞为贴壁细胞或悬浮细胞，例如哺乳动物(例如啮齿类动物和灵长类动物，例如鼠、猴和人)的呼吸道上皮细胞、肝细胞、肺细胞、肾细胞、宫颈细胞、卵巢细胞、骨细胞、乳腺细胞、横纹肌细胞、胃上皮细胞、皮肤表皮细胞、成纤维细胞和前列腺细胞；优选地，所述活的RSV病毒位于所述宿主细胞的表面。