[发明专利]稳定呼吸道合胞病毒融合蛋白的方法

权利要求书

1.一种灭活呼吸道合胞病毒且稳定所述呼吸道合胞病毒中的pre-F蛋白的方法，其包括以下步骤：

(1)提供包含活的呼吸道合胞病毒的宿主细胞；

(2)使用甲醇溶液对所述包含活的呼吸道合胞病毒的宿主细胞进行固定和灭活，其中，甲醇的浓度按重量计为0.3125％-5％(w/w)，固定和灭活温度为25℃，固定和灭活时间持续不超过12h；

和

(3)从步骤(2)的产物中去除所述固定剂，从而获得灭活的呼吸道合胞病毒。

2.权利要求1所述的方法，其中，在步骤(1)中，通过下述步骤来提供活的呼吸道合胞病毒：(1a)用呼吸道合胞病毒感染宿主细胞；(1b)在允许呼吸道合胞病毒增殖的条件下，培养步骤(1a)获得的经感染的宿主细胞；和(1c)收集步骤(1b)获得的经培养的宿主细胞，其包含活的呼吸道合胞病毒。

3.权利要求2所述的方法，其中，在步骤(1c)中，在收集所述经培养的宿主细胞之前，对所述经培养的宿主细胞进行洗涤。

4.权利要求1所述的方法，其中，所述宿主细胞为贴壁细胞或悬浮细胞。

5.权利要求4所述的方法，其中，所述宿主细胞选自哺乳动物的呼吸道上皮细胞、肝细胞、肺细胞、肾细胞、宫颈细胞、卵巢细胞、骨细胞、乳腺细胞、横纹肌细胞、胃上皮细胞、皮肤表皮细胞、成纤维细胞和前列腺细胞。

6.权利要求5所述的方法，其中，所述哺乳动物为啮齿类动物或灵长类动物。

7.权利要求6所述的方法，其中，所述哺乳动物为鼠、猴或人。

8.权利要求1-7任一项所述的方法，其中，所述活的呼吸道合胞病毒位于所述宿主细胞的表面。

9.权利要求1-7任一项所述的方法，其中，在步骤(2)中，所述甲醇的浓度为0.3125％-0.625％，0.625％-1.25％，1.25％-2.5％，或者2.5％-5％。

10.权利要求1-7任一项所述的方法，其中，在步骤(2)中，固定和灭活时间持续0.5-12h。

11.权利要求10所述的方法，其中，固定和灭活时间持续0.5-1h，1-5h，或5-12h。

12.权利要求1-7任一项所述的方法，其中，在步骤(3)中，通过透析、过滤或离心来去除所述固定剂。

13.权利要求1-7任一项所述的方法，其中，在步骤(3)中，通过下述步骤来去除所述固定剂：(3a)对步骤(2)的产物进行过滤或离心，并收集经固定的宿主细胞，其包含灭活的呼吸道合胞病毒；(3b)用缓冲液洗涤步骤(3a)收集的经固定的宿主细胞；和，(3c)回收步骤(3b)中的经洗涤的宿主细胞，其包含灭活的呼吸道合胞病毒；或者，在步骤(3)中，通过将步骤(2)的产物透析到不含固定剂的溶液中来去除所述固定剂。

14.一种制备包含pre-F蛋白的免疫原性组合物的方法，其包括以下步骤：

(1)提供包含活的呼吸道合胞病毒的宿主细胞；

(2)使用甲醇溶液对所述包含活的呼吸道合胞病毒的宿主细胞进行固定和灭活，其中，甲醇的浓度按重量计为0.3125％-5％(w/w)，固定和灭活温度为25℃，固定和灭活时间持续不超过12h；

和

(3)从步骤(2)的产物中去除所述固定剂，从而获得包含pre-F蛋白的免疫原性组合物。