[发明专利]一种检测外泌体tRFRNA的方法

摘要

本发明提供了一种用于检测外泌体tRF RNA的方法。本发明所述检测方法，在tRF RNA两端加上接头序列,针对接头序列设计通用预扩增引物可以对所有小RNA进行无差别扩增，然后再以预扩增产物为模板，针对接头序列和tRF RNA序列设计特异性扩增tRF RNA的引物序列，进行针对tRF RNA的特异性扩增反应。本发明提供的检测方法，可实现外泌体tRF RNA的定量PCR检测，且本检测方法既可以增加PCR检测tRF RNA的灵敏度，又可以通过跨接头设计PCR扩增引物来区分tRF RNA及其前体tRNA。此外，本发明设计的接头序列和引物序列灵敏度高，特异性好。 1

主权项

1.一种检测外泌体tRF RNA的方法，其特征在于，所述方法包括：在tRF RNA两端加上接头序列,针对接头序列和tRF RNA序列设计引物序列，进行扩增反应。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：所述在tRF RNA两端加上接头序列后，先要针对所述接头序列设计预扩增引物，进行预扩增反应，然后再以预扩增产物为模板，针对接头序列和tRF RNA序列设计引物序列，进行扩增反应。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述在tRF RNA两端加上接头序列包括：

1)提取待测样品的外泌体RNA；

2)进行3’端加接头序列反应；

3)根据3’端接头序列设计引物，进行3’端引物杂交反应；

4)进行5’端加接头序列反应；

5)进行逆转录反应。

4.根据权利要求1、2和/或3任一所述的方法，其特征在于，所述进行扩增反应包括进行实时荧光定量PCR反应。

5.根据权利要求1、2、3和/或4任一所述的方法，其特征在于，

所述接头序列包括：序列表中SEQ ID№：1所示3’端接头核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：3所示5’端接头核苷酸序列；

所述针对接头序列和tRF RNA序列设计的引物序列包括：序列表中SEQ ID№：6‑SEQ ID№：12所示的至少一种正向引物核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：13‑SEQ ID№：19所示反向引物核苷酸序列中的至少一种。

6.根据权利要求2、3、4和/或5任一所述的方法，其特征在于，所述预扩增引物序列包括：序列表中SEQ ID№：4所示正向引物核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：5所示反向引物核苷酸序列。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中根据3’端接头序列设计的引物包括序列表中SEQ ID№：2所示核苷酸序列。

8.一种用于检测外泌体tRF RNA的接头序列或引物序列，其特征在于，

所述接头序列包括序列表中SEQ ID№：1所示3’端接头核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：3所示5’端接头核苷酸序列；

所述引物序列包括：序列表中SEQ ID№：6‑SEQ ID№：12所示的至少一种正向引物核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：13‑SEQ ID№：19所示反向引物核苷酸序列中的至少一种。

9.一种用于检测外泌体tRF RNA的组合物或试剂盒，其特征在于，所述组合物或试剂盒包括下述1)‑3)中的至少一种：

1)权利要求8所述的接头序列和引物序列；

2)序列表中SEQ ID№：4所示正向引物核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：5所示反向引物核苷酸序列；

3)序列表中SEQ ID№：2所示核苷酸序列。

10.权利要求1‑7任一所述方法、权利要求8所述接头序列或引物序列、权利要求9所述组合物或试剂盒在检测外泌体tRF RNA、或在制备检测外泌体tRF RNA相关产品中的应用。