[发明专利]一种高灵敏度的铅离子检测方法

摘要

本发明主要涉及生物技术领域，公开了一种高灵敏度的铅离子检测方法，包括：样品处理、引物制备、互补杂交、等温扩增、模拟酶制备、催化显色、铅离子浓度计算；操作简单，原理清晰，使用的各步反应条件成熟，易于控制，同时不需要标记荧光和金纳米基团，避免降低脱氧核酶的活性，无需使用昂贵的试剂和大型仪器，成本低廉，反应时间较快，总反应时间小于2h，同时对铅离子的检测较为灵敏，最低检测浓度为10nM，能够对水体进行严格监控，治理环境污染，保障人体安全，同时显色明显，肉眼可视，提供一种新的铅离子检测方法。

主权项

1.一种高灵敏度的铅离子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品处理：先将待测样品经0.22μm的超微滤膜过滤，再分别稀释10倍、20倍、50倍、100倍、500倍和1000倍，得样品稀释液；（2）引物制备：将样品稀释液分别加入GR‑5脱氧核酶中至体积为40μL，于25℃孵育切割3min，再加入5μL终止液，混合均匀，于4℃进行保存，得引物单链X；（3）互补杂交：分别吸取3μL引物单链X、3μL质量浓度为1μM模板链X’‑Y’、3μL质量浓度为2.5mM的dNTPs、15.2μL超纯水，混合均匀，先于95℃孵育5min，得杂交链；（4）等温扩增：向杂交链中加入5.8μL复合酶溶液，于55℃孵育8min，再置于95℃保温10min，置于‑20℃备用，得单链Y‑G4‑DNA；（5）模拟酶制备：分别吸取10μL单链Y‑G4‑DNA、30μL酶活缓冲液、60μL血红素Hemin稀释溶液，混合均匀，于37℃保温反应30min，得模拟酶Hemin‑G4；（6）催化显色：向模拟酶Hemin‑G4中加入3,3',5,5'‑四甲基联苯胺（TMB）显色液50μL，混合均匀，于37℃恒温反应10min，再加入50μL质量浓度为2M的硫酸溶液，混合均匀，于450nm处检测吸光值，得450nm吸光值；（7）铅离子浓度计算：将450nm吸光值带入线性回归方程，得铅离子浓度。