[发明专利]一种白顶溪鸲线粒体控制区扩增嵌套引物及扩增、克隆和测序方法有效
申请号: | 201711332619.2 | 申请日: | 2017-12-13 |
公开(公告)号: | CN108048457B | 公开(公告)日: | 2021-04-13 |
发明(设计)人: | 阚显照;丁恒武;董锦绣;蒋澜;王青青;吴璇 | 申请(专利权)人: | 安徽师范大学 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;C12Q1/686;C12Q1/6869 |
代理公司: | 北京风雅颂专利代理有限公司 11403 | 代理人: | 杨红梅 |
地址: | 241000*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | 本发明公开了一种白顶溪鸲线粒体控制区扩增嵌套引物及扩增、克隆和测序方法,属于生物技术领域,本发明采用6组扩增嵌套引物对白顶溪鸲线粒体控制区进行2次PCR扩增,第一轮PCR的产物可直接进行测序,第二轮PCR扩增出的片段结合琼脂糖凝胶回收纯化快速克隆技术可以大大提高测序模板的纯度和浓度,以消除测序过程中的异质性,有效攻克了多聚核苷酸序列导致测序失败的难题,直接测序结合克隆测序大大减轻了操作者的工作负担,本发明采用扩增嵌套引物二级结构少,构象稳定,6种嵌套引物的3’末端均避免了A碱基的引入从而大大降低非特异性扩增的风险。 | ||
搜索关键词: | 一种 白顶溪鸲 线粒体 控制区 扩增 嵌套 引物 克隆 方法 | ||
【主权项】:
1.一种白顶溪鸲线粒体控制区扩增嵌套引物,其特征在于,所述的扩增嵌套引物包括SEQ ID NO.1-6所示的特异性嵌套引物,其中,SEQ ID NO.1:ATCTCCAACTCCCAAAGCT;SEQ ID NO.2:CAAACTGGGATTAGATACC;SEQ ID NO.3:TCTCACGAGAACCGAGCTAC;SEQ ID NO.4:ATCTTCCTCTTGACATGTCC;SEQ ID NO.5:GGTATTTTCAACTAAACTACTT;SEQ ID NO.6:AGGGTATGTACTCTCTGCATCG。
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