[发明专利]油莎草总黄酮提取物、活性单体荭草苷及其提取方法和应用

摘要

本发明涉及植物总黄酮提取和应用技术领域，是一种油莎草总黄酮提取物、活性单体荭草苷及其提取方法和应用，该油莎草总黄酮提取物，先将油莎草地上茎叶采用乙醇溶液回流提取，合并提取液，减压浓缩至得到浸膏，浸膏采用预处理后的大孔树脂柱层析进行后，在分离过程中，依次采用水和30％的乙醇溶液洗脱后得到30％乙醇洗脱部位，将30％乙醇洗脱部位依序经过减压浓缩和冷冻干燥后得到油莎草总黄酮提取物。本发明首次公开油莎草总黄酮提取物和活性单体荭草苷在制备治疗缺血性脑中风药物中的应用，药理实验说明，油莎草总黄酮提取物和活性单体荭草苷两者对I/R损伤均具有保护作用。 1

主权项

1.一种油莎草总黄酮提取物，其特征在于按下述方法得到：第一步，将烘干后的油莎草地上茎叶采用50％至95％的乙醇溶液回流提取2次至3次，合并提取液，将合并后的提取液减压浓缩至得到浸膏；第二步，将第二步得到的浸膏采用预处理后的大孔树脂柱层析进行分离，在分离过程中，依次采用水和30％的乙醇溶液洗脱后得到30％乙醇洗脱部位；第三步，将30％乙醇洗脱部位依序经过减压浓缩和冷冻干燥后得到油莎草总黄酮提取物。

2.根据权利要求1所述的油莎草总黄酮提取物，其特征在于第一步中，每次提取的时间为1.5h；或/和，大孔树脂采用D101大孔树脂，D101大孔树脂的预处理按下述方法进行：将大孔树脂用无水乙醇回流提取直至大孔树脂充分的溶胀，然后再用不同浓度的无水乙醇梯度洗脱，直至洗脱液加水后无白色浑浊溶出，再用蒸馏水进行洗脱，直至洗脱下来的溶液没有醇味为止。

3.一种根据权利要求1或2所述的油莎草总黄酮提取物的提取方法，其特征在于按下述方法进行：第一步，将烘干后的油莎草地上茎叶采用50％至95％的乙醇溶液回流提取2次至3次，合并提取液，将合并后的提取液减压浓缩至得到浸膏；第二步，将第二步得到的浸膏采用预处理后的大孔树脂柱层析进行分离，在分离过程中，依次采用水和30％的乙醇溶液洗脱后得到30％乙醇洗脱部位；第三步，将30％乙醇洗脱部位依序经过减压浓缩和冷冻干燥后得到油莎草总黄酮提取物。

4.一种根据权利要求1或2所述的油莎草总黄酮提取物在制备治疗缺血性脑中风药物中的应用。

5.一种使用权利要求1或2所述的油莎草总黄酮提取物提取的活性单体荭草苷，其特征在于按下述方法得到：第一步，将油莎草总黄酮提取物用聚酰胺拌样后，在反相硅胶柱中采用不同浓度的甲醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，每瓶100mL，共收集77瓶，将分别得到的77瓶洗脱液采用薄层层析检测，薄层层析检测结果以蓝黑色斑或者黄绿色斑为判断标准，根据显色定性结果合并斑点颜色相似的洗脱液，将斑点颜色相似的第56瓶至61瓶洗脱液合并得到洗脱液一；第二步，将洗脱液一在葡聚糖凝胶柱利用甲醇进行洗脱，收集洗脱液，每瓶10mL，共收集90瓶，前第1瓶至第30瓶用A依次编号，第1瓶编号为A₁，以此类推，第30瓶编号为A₃₀，第31瓶至第60瓶用B依次编号，第31瓶编号为B₁，以此类推，第60瓶编号为B₃₀，第61瓶至第90瓶用C依次编号，第61瓶编号为C₁，以此类推，第90瓶编号为C₃₀，合并A₂₃至A₂₈、B₂₁至B₂₇和C₂₃至C₂₇得到合并流分，将合并流分经过减压浓缩和冷冻后得到活性单体荭草苷。

6.根据权利要求5所述的活性单体荭草苷，其特征在于第一步中，在反相硅胶柱中采用浓度为10％、20％、30％、40％、50％、70％和100％的甲醇溶液进行梯度洗脱；或/和，反相硅胶柱采用ODS RP‑18反相硅胶柱；或/和，葡聚糖凝胶柱采用Sephadex LH‑20葡聚糖凝胶柱。

7.一种根据权利要求5或6所述的活性单体荭草苷的提取方法，其特征在于按下述方法进行：第一步，将油莎草总黄酮提取物用聚酰胺拌样后，在反相硅胶柱中采用不同浓度的甲醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，每瓶100mL，共收集77瓶，将分别得到的77瓶洗脱液采用薄层层析检测，薄层层析检测结果以蓝黑色斑或者黄绿色斑为判断标准，根据显色定性结果合并斑点颜色相似的洗脱液，将斑点颜色相似的第56瓶至61瓶洗脱液合并得到洗脱液一；第二步，将洗脱液一在葡聚糖凝胶柱利用甲醇进行洗脱，收集洗脱液，每瓶10mL，共收集90瓶，前第1瓶至第30瓶用A依次编号，第1瓶编号为A₁，以此类推，第30瓶编号为A₃₀，第31瓶至第60瓶用B依次编号，第31瓶编号为B₁，以此类推，第60瓶编号为B₃₀，第61瓶至第90瓶用C依次编号，第61瓶编号为C₁，以此类推，第90瓶编号为C₃₀，合并A₂₃至A₂₈、B₂₁至B₂₇和C₂₃至C₂₇得到合并流分，将合并流分经过减压浓缩和冷冻后得到活性单体荭草苷。

8.一种根据权利要求5或6所述的活性单体荭草苷在制备治疗缺血性脑中风药物中的应用。

9.一种根据权利要求5或6所述的活性单体荭草苷在制备治疗缺血再灌注24小时引起的缺血性脑中风药物中的应用。