[发明专利]一种基于CRISPR系统的基因组编辑方法及其应用有效
| 申请号： | 201711194336.6 | 申请日： | 2017-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN107937432B | 公开（公告）日： | 2020-05-01 |
| 发明（设计）人： | 谢卡斌;陈凯园;丁丹 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N9/22 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 430000 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于CRISPR系统的基因组编辑方法，属于基因编辑技术领域，本发明所述的方法利用内含子来表达CRISPR基因组编辑系统中的引导RNA分子，其原理是将一个或多个tRNA‑gRNA或crRNA串联单元置于编码基因的内含子中，并且可以将该内含子与Cas9或Cpf1形成融合基因后用一个启动子驱动。所述方法巧妙利用了细胞内源的mRNA剪接系统和tRNA加工系统，不需要添加其他元件，不仅安全性更高，而且可以更加简单；而利用一个启动子实现多个引导RNA与Cas9或Cpf1的同步表达，简化了已有的CRISPR编辑系统，同时提高了CRISPR编辑系统的同时编辑多个靶位点的效率和能力。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 crispr 系统 基因组 编辑 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种基于CRISPR系统CRISPR/Cas9的基因组编辑方法，包括以下步骤：1)将1个或多个重复的tRNA‑gRNA串联单元置于编码基因的内含子中获得inPTG内含子；2)将获得的inPTG内含子与含Cas9核酸酶基因的外显子融合成一个inPTG‑Cas9基因；3)利用单个启动子来驱动inPTG‑Cas9融合基因的表达，获得表达载体；4)将所述含inPTG‑Cas9融合基因表达元件的载体导入受体细胞进行转录表达，获得Cas9核酸酶和多个gRNA；5)所述gRNA与Cas9核酸酶共同作用编辑受体细胞基因组序列。
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