[发明专利]一种从叶片山海绵中分离吡咯醛类化合物的方法及其吡咯醛类化合物

摘要

本发明公开了一种从叶片山海绵中分离吡咯醛类化合物的方法及其吡咯醛类化合物，将叶片山海绵破碎后，乙醇浸提，除盐，得到海绵总提取物；海绵总提取物用石油醚及二氯甲烷萃取得到吡咯醛类总提取物；吡咯醛类总提取物用硅胶色谱柱分离后，再进行反相色谱分离，再依次用制备高效液相法和半制备高效液相法进行单体纯化，得到8个高纯度的吡咯醛类化合物，其中两个为首次报道的新化合物。本发明的方法能够快速富集和分离吡咯醛类物质，且分离速度快、效率高。

主权项

1.一种从叶片山海绵中分离吡咯醛类化合物的方法，其特征在于：包括：1)将叶片山海绵破碎后，加入1～2倍量无水乙醇，在8000～12000r/min转速下湿法粉碎；粉碎后海绵加入4.5～5.5倍量无水乙醇浸泡6～8d，且每天超声振动辅助提取0.5～1.5h，然后固液分离，固体部分重复上述加入无水乙醇浸泡→超声振动辅助提取→固液分离的步骤若干次，合并得到的液体部分，得到海绵粗浸提液；2)取步骤1)得到的海绵粗浸提液，回收溶剂至干，得到乙醇粗提物；向该乙醇粗提物中加入0.8～1.2倍量甲醇，产生的沉淀通过固液分离除去，液体部分回收溶剂至干，得到海绵总提取物；3)向步骤2)得到的海绵总提取物中加入0.8～1.2倍量的水，制成混悬液；混悬液加入2.5～3.5倍量石油醚萃取，分出石油醚层，剩余部分重复上述石油醚萃取步骤若干次，合并得到的石油醚层，回收溶剂至干，得到石油醚提取物；最后一次石油醚萃取并分出石油醚层后的剩余部分加入2.5～3.5倍量二氯甲烷萃取，分出二氯甲烷层，剩余部分重复上述二氯甲烷萃取步骤若干次，合并得到的二氯甲烷层，回收溶剂至干，得到二氯甲烷提取物；合并石油醚提取物与二氯甲烷提取物，得到吡咯醛类总提取物；4)取步骤3)得到的吡咯醛类总提取物，加入0.3～0.5倍量的二氯甲烷溶解后，按照上样量与硅胶的质量比为1:4～6的比例取100～200目色谱用硅胶，湿法装柱，色谱柱规格45cm×10cm；湿法上样后，进行柱色谱分离：以二氯甲烷-甲醇混合液及甲醇为洗脱液，依次按照93～97％二氯甲烷→78～82％二氯甲烷→58～62％二氯甲烷→38～42％二氯甲烷→18～22％二氯甲烷→0％二氯甲烷进行梯度洗脱，每一梯度洗脱1～12个柱体积，分别收集各梯度的洗脱液，浓缩至干，通过薄层色谱分离、检识并合并碘化铋钾阳性的洗脱部分；5)取步骤4)得到的碘化铋钾阳性的洗脱部分进行反相色谱分离：色谱填料为YMC ODS-A，粒径50μm；湿法上样；以甲醇-水混合液及甲醇为洗脱液，依次按照58～62％甲醇→68～72％甲醇→78～82％甲醇→88～92％甲醇→98～100％甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱4～8个柱体积，分别收集各梯度的洗脱液，得到58～62％甲醇组分、68～72％甲醇组分、78～82％甲醇组分、88～92％甲醇组分、98～100％甲醇组分；6)取步骤5)中得到的68～72％甲醇组分，加入甲醇溶解并制成0.75～0.85mg/ml的溶液，采用制备高效液相法进行纯化：HPLC条件为：固定相：HPLC制备柱YMC ODS-A，250×20mm，粒径5μm；流动相：88～92％甲醇；流速：7.5～8.5ml/min；进样量：0.4～0.6ml；检测波长：210nm和300nm；收集吡咯醛类化合物特征吸收峰洗脱液，浓缩，得到含有一系列吡咯醛类化合物的粗品；7)取步骤6)得到的粗品，加入甲醇溶解并制成0.9～1.1mg/ml的溶液，采用半制备高效液相法进行纯化：HPLC条件为：固定相：HPLC半制备柱YMC ODS-A，250×10mm，粒径5μm；流动相：88～92％甲醇；流速：1.4～1.6ml/min；进样量：48～52μl；检测波长：210nm和300nm；收集吡咯醛类化合物特征吸收峰洗脱液，浓缩，得到含有一系列吡咯醛类化合物的纯品。