[发明专利]一种从黄芪中提取分离活性多肽的方法

摘要

本发明涉及一种从黄芪中提取分离活性多肽的方法，是将经鉴定无误的干燥黄芪切片经过醇液超声提取、过滤、浓缩、萃取、有机试剂富集、柱分离分别制得黄芪中的多肽。本发明对具有抗虫活性的多肽进行跟踪，并结合传统的植物化学分析方法、生物化学方法及现代色谱方法进行多肽逐步分离、纯化，无需添加脱盐、真空浓缩、超滤分离、特殊色谱柱填料等操作，简化了生产工艺，成本低，为现代植物多肽的研究提供了一定的技术参考及指导。

主权项

1.一种从黄芪中提取分离活性多肽的方法，步骤包括：(1)将黄芪粉碎，药材粉末加入甲醇或乙醇‑水溶剂，在超声或水浴加热浸提，抽滤，得黄芪提取液及滤渣,滤渣重复上述提取方式1～2次；(2)将黄芪提取液减压加热浓缩至无醇味，按照黄芪提取液与去离子水体积比1:100～200加入去离子水混悬，按照体积比(黄芪提取液:乙酸乙酯)1:1～2向混悬液中加入乙酸乙酯,混匀,静置,分两层,得到含乙酸乙酯的萃取液Ⅰ和不含乙酸乙酯的萃取液Ⅱ；(3)取萃取液Ⅱ，按照体积比(萃取液:正丁醇)1:1～2加入正丁醇，混匀，静置，分两层，得到含有正丁醇的萃取液Ⅲ和不含正丁醇的萃取液Ⅳ；(4)将萃取液Ⅲ进行减压加热浓缩至干，按照所得干燥物Ⅰ黄芪提取液与去离子水体积比1:100～200加入去离子水混悬，进行有机混合试剂萃取，混匀，静置，分三层，取中间白色沉淀层，氮气保护加热浓缩至干得干燥物Ⅱ；(5)干燥物Ⅱ用去离子水(含0.1～0.3％甲酸，干燥物与去离子水体积比＝1:30～100)超声溶解，离心，取上清液上样于MCI开放柱，并按照6～10倍柱体积进行梯度洗脱：H₂0、30％MeOH、50％MeOH、65％～85％MeOH(70％MeOH最优)、100％MeOH(均含0.1～0.3％FA)，分别收集馏分进行减压加热浓缩得洗脱液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ；(6)将已浓缩得到的洗脱液Ⅳ，通过HPLC梯度洗脱分析及纯化，收集目标多肽的洗脱液，在氮气保护加热浓缩至干，得到黄芪目标多肽成品。