[发明专利]CRISPR-Cas9系统介导的小鼠FGF5基因敲除的方法在审
| 申请号： | 201711145330.X | 申请日： | 2017-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN109811008A | 公开（公告）日： | 2019-05-28 |
| 发明（设计）人： | 郭旭东;白宇;张晓枫;张蒙;梁浩 | 申请（专利权）人： | 内蒙古大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/89;C12N15/877;A01K67/027 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 010021 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明是根据小鼠FGF5基因序列，构建基于CRISPR‑Cas9系统的sgRNA表达载体，将sgRNA和Cas9 质粒混合物对受精卵原核注射，胚胎移植，品系基因鉴定，得到基因突变鼠，并pcr测序，确认最终得到遗传性小鼠突变模型。本发明构建的CRISPR‑Cas9介导的打靶载体为小鼠FGF5基因的敲除提供了一种简便快速安全的途径，该方法实现了不添加任何筛选标记即可筛选定点整合外源基因细胞系，大大提高了转基因动物的安全性，对小鼠的遗传育种具有重要价值。 | ||
| 搜索关键词： | 小鼠 构建 介导 转基因动物 受精卵 表达载体 打靶载体 定点整合 基因鉴定 基因敲除 基因突变 基因序列 快速安全 胚胎移植 筛选标记 突变模型 外源基因 遗传育种 原核注射 混合物 遗传性 敲除 质粒 品系 筛选 基因 | ||
【主权项】：
1.一种基于CRISPR/Cas9获得FGF5突变小鼠模型的构建方法，其特征包括以下步骤：第1步：构建基于CRISPR‑Cas9系统的sgRNA表达载体。第2步：将sgRNA和Cas9 质粒混合物对受精卵原核注射，胚胎移植，品系基因鉴定，得到基因突变小鼠，并pcr测序，确认最终得到的FGF5基因突变的遗传性小鼠突变模型。
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