[发明专利]一种狗脊贯众组织培养技术

摘要

本发明公开了一种狗脊贯众组织培养技术，狗脊贯众为乌毛蕨科植物，狗脊蕨和单芽狗脊的带叶柄残基的干燥根茎。春、秋两季采挖，削去叶柄、须根，除去泥土，洗净，晒干。狗脊贯众药材呈长圆柱形，或削成柱状、方柱状，挺直或稍弯曲，上端钝，下端较尖。根茎粗壮，密被短粗的叶柄残基。鳞片棕红色，全缘，细根棕黑色。叶柄残基坚硬，横断面半圆形。质坚硬，不易折断。气微弱而特异，味微苦涩。以整齐、质硬、表面红棕色者为佳。含有儿茶酚衍生物。本发明以狗脊贯众带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了狗脊贯众的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术保证。

主权项

一种狗脊贯众组织培养技术，其特征在于包括以下步骤：（1）芽诱导培养：以狗脊贯众带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成6.5厘米长的带有5个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡13min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗6h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒36s后用无菌水洗7次，再用0.2%升汞溶液消毒30min，用无菌水冲洗9次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后每天光照16小时，光照强度为3000lx条件下培养35天，统计其芽诱导率及生长情况；（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后每天光照16小时，光照强度为2600lx，培养温度为25℃的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为6cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后每天光照16小时，光照强度为3600lx，培养温度为25℃的条件下培养41天后统计生根情况；（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约10cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗10天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝2:3：1混合成的基质，光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽。