[发明专利]一种狗脊贯众组织培养技术

说明书

技术领域

本发明属于植物类，具体地说，涉及一种狗脊贯众组织培养技术。

背景技术

狗脊贯众为乌毛蕨科植物，狗脊蕨和单芽狗脊的带叶柄残基的干燥根茎。主产四川、贵州、云南、广东、广西等地。春、秋两季采挖，削去叶柄、须根，除去泥土，洗净，晒干。药材呈长圆柱形，或削成柱状、方柱状，挺直或稍弯曲，上端钝，下端较尖，长6~25cm，直径2~7cm。表面红棕色或黑棕色。根茎粗壮，密被短粗的叶柄残基。鳞片棕红色，全缘，细根棕黑色。叶柄残基坚硬，横断面半圆形，分体中柱2~8个或 5~8个。质坚硬，不易折断。气微弱而特异，味微苦涩。以整齐、质硬、表面红棕色者为佳。含有儿茶酚衍生物。具有清热解毒，杀虫散瘀功用。用于感冒，疮痈，虫积腹痛，便血，崩漏、下痢。用于预防感冒，流行性感冒及流行性脑膜炎。目前，狗脊贯众采用扦插繁殖法，远远不能满足大规模生产种苗的需要。并且，种子繁殖后代之间在药效成分均存差异，不利于优良品种的推广。利用植物组织培养技术能有效解决濒危珍稀物种拯救和野生植物资源匮乏的问题。因此建立组织培养技术解决种苗供应问题。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种以狗脊贯众带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了狗脊贯众的离体再生。种子发芽率高，种苗粗壮，生长快速，收益大的一种狗脊贯众组织培养技术。

本发明的一种狗脊贯众组织培养技术，其特征在于包括以下的步骤：

（1）芽诱导培养：以狗脊贯众带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成6.5厘米长的带有5个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡13min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗6h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒36s后用无菌水洗7次，再用0.2%升汞溶液消毒30min，用无菌水冲洗9次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后每天光照16小时，光照强度为3000lx条件下培养35天，统计其芽诱导率及生长情况；

（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后每天光照16小时，光照强度为2600lx，培养温度为25℃的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；

（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为6cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后每天光照16小时，光照强度为3600lx，培养温度为25℃的条件下培养41天后统计生根情况；

（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约10cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗10天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝2:3：1混合成的基质，光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽。

步骤（1）所述的芽诱导培养基为：MS+9mg/L6-BA+5mg/L NAA+33g/L蔗糖+9.0g/L琼脂，pH为5.8。

步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.5mg/LNAA+10mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+9.0g/L琼脂，pH为5.8。

步骤（3）所述的生根培养基为：1/4MS+1.5mg/L NAA+1.5mg/L IBA+33g/L蔗糖+9.0g/L琼脂，pH为5.8。

与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量狗脊贯众优良品种苗木的方法。以狗脊贯众带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了狗脊贯众的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持。技术方法简单，操作容易，种子发芽率高，种苗生长良好，产量高。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1