[发明专利]一种细胞培养收获液中病毒颗粒的电镜定量检测方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种细胞培养收获液中病毒颗粒的电镜定量检测方法。本发明建立的检测方法，由于加入了非吸附型纳米颗粒，在超速离心过程中可通过其表面非特异性吸附的形式吸附低密度病毒颗粒，使得病毒颗粒更多地聚集到铜网上，检测下限由原先的1×106‑7个/ml提高至2×103‑5个/ml，综合提高了10‑1000倍的检测灵敏度。由于加入已知浓度的纳米颗粒标准物作为参照，使病毒定量幅度加宽，定量精确度与标准的生物学测定法(病毒滴度测定法)相当，这一发明让负染色电子显微镜病毒定量法的广泛应用得以实现。

主权项

一种细胞培养收获液中病毒颗粒的电镜定量检测方法，包括下述步骤：1）预处理：按照常规离心方式去除待测样品中的细胞碎片和杂质，经超速离心浓缩后的病毒，用MEM或PBS溶解；2）上样检测：将经过步骤1）预处理的待测样品与纳米颗粒混合，将铜网置于该混合物中后超速离心；将铜网取出，清洗后的铜网磷钨酸负染，电镜观察；3）计数：若发现病毒样颗粒，则对不同网格中的纳米颗粒或病毒样颗粒进行计数，每个网格至少观察5个视野，结果中会给出网格中纳米颗粒和病毒样颗粒各自的数目，并根据两者的比例关系计算出检测样品中病毒样颗粒的浓度。