[发明专利]一种治疗胶质瘤的基于靶向FMRP的CAP23145多肽的生产方法

摘要

本发明公开了一种治疗胶质瘤的基于靶向FMRP的CAP23145多肽的生产方法，主要是根据FMRP、Caprin‑1序列及相互作用特点，利用计算机空间模拟软件，设计可与FMRP特异性结合、并能阻断这两者相互作用的CAP23145多肽；然后合成所设计的多肽；该多肽对胶质瘤的靶向性更强，在杀伤胶质瘤细胞的同时不对正常胶质细胞产生明显的杀伤，减轻药物化疗的副作用。

主权项

一种治疗胶质瘤的基于靶向FMRP的CAP23145多肽的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)根据FMRP、Caprin‑1序列及相互作用特点，利用计算机空间模拟软件，设计可与FMRP特异性结合、并能阻断这两者相互作用的CAP23145多肽；(2)合成所设计的多肽，包括如下生产流程：A、合成原料及相关试剂、仪器；a、树脂:取代度为1.03mmol/g的2‑Chlorotrityl Chloride Resin；b、氨基酸:Fmoc‑Tyr(Tbu)‑OH，Fmoc‑Asn(Trt)‑OH，Fmoc‑Ser(Tbu)‑OH等；c、特殊原料:D‑Biotin；d、合成试剂:DMF，DCM，MEOH，DIEA，HBTU；e、脱保护试剂:哌啶；f、检测试剂:苯酚试剂，吡啶试剂，茚三酮试剂；g、裂解试剂:95％切割液:TFA，TIS，EDT，无水乙醚；h、氮气；i、仪器:①.十二通道半自动多肽合成仪；②.SHIMADZU高效液相色谱仪；③.LABCONCO冻干机；B、多肽合成步骤如下:合成顺序:从C端到N端；a、树脂溶涨：将2‑Chlorotrityl Chloride Resin放入反应管中，加DCM并振荡；b、接第一个氨基酸：通过沙芯抽滤掉溶剂，加入Fmoc‑Tyr(Tbu)‑OH氨基酸，加入DMF溶解，再加入DIEA并振荡，用甲醇封闭；c、脱保护：去掉DMF，加哌啶DMF溶液，去掉再加一次哌啶DMF溶液；d、检测:抽掉哌啶溶液，取树脂若干粒，用乙醇洗净，然后加入检测试剂检测，变深蓝色为阳性反应；e、第一次洗:DMF(10ml/g)两次，DCM(10ml/g)两次，DMF(10ml/g)两次；f、缩合:将保护氨基酸、HBTU均用DMF溶解，加入反应管，立刻加入DIEA进行反应；g、检测:取树脂若干粒，用乙醇洗净后，加入检测试剂检测，然后加热，无色为阴性反应；h、第二次洗:DMF(10ml/g)一次，DCM(10ml/g)两次，DMF(10ml/g)两次；i、重复三至六步操作，从右到左依次连接序列中的氨基酸，最后接D‑Biotin；j、抽干，按照下列方法洗树脂:先DMF洗，再用甲醇洗，接着用再DMF洗，接着用DCM洗，最后抽干；k、从树脂上切割多肽:配制切割液、水、EDT、TIS，然后进行切割；l、吹干洗涤:将裂解液用氮气吹干，用乙醚洗六次，然后常温挥干；m、分析提纯:用高效液相色谱将粗品提纯；n、冻干：收集目标多肽溶液放入冻干机中进行浓缩，冻干成白色粉末。