[发明专利]一种治疗胶质瘤的基于靶向FMRP的CAP23145多肽的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽的生产方法，尤其涉及一种治疗胶质瘤的基于靶向FMRP的CAP23145多肽的生产方法。

背景技术

脑胶质瘤是神经系统最为常见的原发性恶性肿瘤，其中一半以上为恶性程度较高的胶质母细胞瘤，目前胶质瘤发病率呈逐年增高趋势，且死亡率高，术后生存率低，是影响我国居民健康的重要恶性肿瘤。

目前胶质瘤的治疗仍以手术切除治疗为主，辅以放化疗，但总体效果欠佳，脑胶质瘤细胞成分的复杂性、肿瘤生长的侵润性以及血脑屏障对治疗药物的阻断作用是造成这种局面的主要因素。

发明内容

针对上述问题，本发明提出一种治疗胶质瘤的基于靶向FMRP的CAP23145多肽的生产方法，该多肽对胶质瘤的靶向性更强，在杀伤胶质瘤细胞的同时不对正常胶质细胞产生明显的杀伤，减轻药物化疗的副作用。

本发明技术方案的具体步骤如下：

一种治疗胶质瘤的基于靶向FMRP的CAP23145多肽的生产方法，包括如下步骤：

(1)根据FMRP、Caprin-1序列及相互作用特点，利用计算机空间模拟软件，设计可与FMRP特异性结合、并能阻断这两者相互作用的CAP23145多肽；

(2)合成所设计的多肽，包括如下生产流程：

A、合成原料及相关试剂、仪器；

a、树脂:取代度为1.03mmol/g的2-Chlorotrityl Chloride Resin；b、氨基酸:

Fmoc-Tyr(Tbu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(Tbu)-OH等；

c、特殊原料:

D-Biotin；

d、合成试剂:

DMF，DCM，MEOH，DIEA，HBTU；

e、脱保护试剂:哌啶；

f、检测试剂:苯酚试剂，吡啶试剂，茚三酮试剂；

g、裂解试剂:

95％切割液:TFA，TIS，EDT，无水乙醚；

h、氮气；

i、仪器:

①.十二通道半自动多肽合成仪；

②.SHIMADZU高效液相色谱仪；

③.LABCONCO冻干机；

B、多肽合成步骤如下:合成顺序:从C端到N端；

a、树脂溶涨：

将2-Chlorotrityl Chloride Resin放入反应管中，加DCM并振荡；

b、接第一个氨基酸：

通过沙芯抽滤掉溶剂，加入Fmoc-Tyr(Tbu)-OH氨基酸，加入DMF溶解，再加入DIEA并振荡，用甲醇封闭；

c、脱保护：

去掉DMF，加哌啶DMF溶液，去掉再加一次哌啶DMF溶液；

d、检测:

抽掉哌啶溶液，取树脂若干粒，用乙醇洗净，然后加入检测试剂检测，变深蓝色为阳性反应；

e、第一次洗:

DMF(10ml/g)两次，DCM(10ml/g)两次，DMF(10ml/g)两次；

f、缩合:

将保护氨基酸、HBTU均用DMF溶解，加入反应管，立刻加入DIEA进行反应；

g、检测:

取树脂若干粒，用乙醇洗净后，加入检测试剂检测，然后加热,无色为阴性反应；

h、第二次洗:

DMF(10ml/g)一次，DCM(10ml/g)两次，DMF(10ml/g)两次；

i、重复三至六步操作，从右到左依次连接序列中的氨基酸，最后接D-Biotin；

j、抽干，按照下列方法洗树脂:

先DMF洗，再用甲醇洗，接着用再DMF洗，接着用DCM洗，最后抽干；

k、从树脂上切割多肽:

配制切割液、水、EDT、TIS，然后进行切割；

l、吹干洗涤:

将裂解液用氮气吹干，用乙醚洗六次，然后常温挥干；

m、分析提纯:

用高效液相色谱将粗品提纯；

n、冻干：

收集目标多肽溶液放入冻干机中进行浓缩，冻干成白色粉末。

作为本发明之优选，所述B步骤的a步骤中，所述树脂溶涨具体为：将2-Chlorotrityl Chloride Resin放入反应管中，加DCM(15ml/g)，振荡30min。