[发明专利]测定丹参多糖水解产物-半乳糖醛酸的方法

摘要

本发明公开了一种采用HPLC法测定丹参多糖水解产物‑半乳糖醛酸的方法，对现有复方丹参片的检验方法进行了补充，检验方法包括如下内容：（1）收集复方丹参片样品，（2）明确色谱条件，（3）测定校正因子，（4）制备供试品溶液，（5）考察被测溶液的稳定性、半乳糖醛酸进样量与峰面积比值的线性关系，并进行准确度、精密度和重现性试验，（6）测定样品中半乳糖醛酸的含量。本发明准确度高、精密度好、重现性好，为复方丹参片中丹参不按标准工艺提取、仅用适宜浓度乙醇提取的检出提供检验依据。

主权项

测定丹参多糖水解产物‑半乳糖醛酸的方法，其特征在于，所述检验方法如下：（1）收集复方丹参片样品；（2）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相；检测波长为250nm；（3）校正因子测定：取盐酸氨基葡萄糖适量，精密称定，加水制成每1mL含1mg的溶液，作为内标溶液；另取半乳糖醛酸对照品约10mg，置20mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，精密吸取2mL，置10mL量瓶中，精密加入内标溶液1mL，加水稀释至刻度，摇匀，吸取400μL，加0.5mol/L的1‑苯基‑3‑甲基‑5‑吡唑啉酮甲醇溶液与0.3mol/L的氢氧化钠溶液各400μL，混匀，70℃水浴反应100分钟；再加0.3mol/L盐酸溶液500μL，混匀，用三氯甲烷洗涤3次，每次2mL，弃去三氯甲烷液，水层加酚酞指示液1滴，用0.3mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至中性，离心，精密吸取0.7mL,精密加入磷酸盐缓冲溶液0.7mL，混匀，吸取20μL，注入液相色谱仪，测定，计算校正因子；（4）供试品溶液的制备：取样品20片，除去包衣，精密称定，研细，取相当于5片的量， 精密称定，精密加水20mL，超声处理1小时，离心5分钟，精密吸取上清液5mL，加无水乙醇5mL，摇匀，4℃放置1小时，离心，弃去上清液，沉淀加50%乙醇洗涤3次，每次2mL，离心10分钟，弃去上清液，沉淀加内标溶液1mL，加水使溶解，转移至5mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；吸取1mL，置顶空瓶中，加3.0mol/L的盐酸溶液0.5mL，封口，混匀，110℃水解2小时，放冷，用3.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至中性；（5）考察被测溶液的稳定性、半乳糖醛酸进样量与峰面积比值的线性关系，并进行准确度、精密度和重现性试验；（6）测定：吸取供试品溶液400μL，加0.5mol/L的1‑苯基‑3‑甲基‑5‑吡唑啉酮甲醇溶液与0.3mol/L的氢氧化钠溶液各400μL，混匀，70℃水浴反应100分钟；再加0.3mol/L盐酸溶液500μL，混匀，用三氯甲烷洗涤3次，每次2mL，弃去三氯甲烷液，水层加酚酞指示液1滴，用0.3mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至中性，离心，精密吸取0.7mL，精密加入磷酸盐缓冲溶液0.7mL，混匀，吸取20μL，注入液相色谱仪，测定，得到结果。