[发明专利]测定丹参多糖水解产物-半乳糖醛酸的方法

说明书

本发明公开了一种采用HPLC法测定丹参多糖水解产物‑半乳糖醛酸的方法，对现有复方丹参片的检验方法进行了补充，检验方法包括如下内容：（1）收集复方丹参片样品，（2）明确色谱条件，（3）测定校正因子，（4）制备供试品溶液，（5）考察被测溶液的稳定性、半乳糖醛酸进样量与峰面积比值的线性关系，并进行准确度、精密度和重现性试验，（6）测定样品中半乳糖醛酸的含量。本发明准确度高、精密度好、重现性好，为复方丹参片中丹参不按标准工艺提取、仅用适宜浓度乙醇提取的检出提供检验依据。

技术领域

本发明涉及中医药检测技术领域，具体是测定丹参多糖水解产物-半乳糖醛酸的方法，属于一种复方丹参片的补充检验方法。

背景技术

复方丹参片的处方由丹参、三七和冰片等三味药材组成，其中丹参依次经95%乙醇、50%乙醇提取及水煎煮后浓缩以浸膏投料，三七细粉和冰片直接入药。据了解，当前市场上用于复方丹参片投料的丹参提取物，多为丹参采用适宜浓度的乙醇提取，而以丹参酮Ⅱ_A含量0.3%、丹酚酸B含量7.0%的丹参提取物投料，即可满足复方丹参片现行药典标准中丹参【鉴别】和【含量测定】的要求。但与复方丹参片中丹参的标准工艺相比，这些丹参提取物缺少水煎煮步骤，多糖含量低。因此，需要对现行药典标准中丹参【鉴别】和【含量测定】要求进行进一步的补充检验。

发明内容

基于此，本发明提供了一种测定丹参多糖水解产物-半乳糖醛酸的方法，采用HPLC法测定丹参多糖水解产物-半乳糖醛酸含量。本发明准确度高、精密度好、重现性好，为复方丹参片中丹参不按标准工艺提取、仅用适宜浓度乙醇提取的检出提供检验依据。

为实现上述技术目的，具体内容如下：

1、仪器与试药：

AgiLent 1100液相色谱仪，可变波长检测器；DAD检测器；Waters UPLC液相色谱仪，可变波长检测器；

半乳糖醛酸对照品：中国药品生物制品检定研究院提供，批号：111646-200301，含量测定用；

盐酸氨基葡萄糖对照品：中国药品生物制品检定研究院提供，批号：140649-201505，含量测定用；

乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

2、测定方法如下：

（1）收集复方丹参片样品；

（2）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用40%氢氧化钠溶液调节pH值至6.9）（18﹕82）为流动相；检测波长为250nm。理论板数按半乳糖醛酸峰计算应不低于3000；

（3）校正因子测定：取盐酸氨基葡萄糖适量，精密称定，加水制成每1mL含1mg的溶液，作为内标溶液；另取半乳糖醛酸对照品约10mg，置20mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，精密吸取2mL,置10mL量瓶中，精密加入内标溶液1mL，加水稀释至刻度，摇匀，吸取400μL，加0.5mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮甲醇溶液与0.3mol/L的氢氧化钠溶液各400μL，混匀，70℃水浴反应100分钟。再加0.3mol/L盐酸溶液500μL，混匀，用三氯甲烷洗涤3次，每次2mL，弃去三氯甲烷液，水层加酚酞指示液1滴，用0.3mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至中性，离心，精密吸取0.7mL，精密加入磷酸盐缓冲溶液（pH12，取0.05mol/L磷酸氢二钠溶液50mL，加0.1mol/L 氢氧化钠溶液26.9mL，用水稀释至100mL即得）0.7mL，混匀，吸取20μL，注入液相色谱仪，测定，计算校正因子；