[发明专利]检测耳聋基因20个突变位点的快速文库构建方法及检测方法有效
| 申请号： | 201711001616.0 | 申请日： | 2017-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN109694908B | 公开（公告）日： | 2023-01-10 |
| 发明（设计）人： | 陈建国;陈川;王瑢;杨传春;张文勇;张瑜巨;庄丽雯 | 申请（专利权）人： | 深圳乐土生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12Q1/686;C40B50/06 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市大*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 一种检测耳聋基因20个突变位点的快速文库构建方法及检测方法，突变位点来自GJB2基因、GJB3基因、SLC26A4基因、MT‑RNR1 12S rRNA基因；该方法包括如下步骤：使用针对突变位点的多重PCR引物对样本DNA进行目标区域扩增；在目标区域扩增产物中加入针对突变位点的分子倒置杂交探针，进行探针变性、退火反应；在恒温聚合酶、磷酸化酶和连接酶的存在下，进行延伸连接反应以将突变位点所在的缺口补齐形成单链环状文库；其中分子倒置杂交探针的两端分别与待测突变位点上下游区域互补。该方法减少反应步骤，降低建库试剂成本，缩短建库周期；采用分子倒置杂交探针，使待测突变位点位于测序读长上游50bp以内，只需要SE50测序就能稳定检测到突变位点，提高数据利用率，降低测序成本。 | ||
| 搜索关键词： | 检测 耳聋 基因 20 突变 快速 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种检测耳聋基因20个突变位点的快速文库构建方法，其特征在于，所述20个突变位点包括GJB2基因的35delG、167delT、176_191del16、235delC、299_300delAT，GJB3基因的538C>T、547G>A，SLC26A4基因的281C>T、589G>A、IVS7‑2A>T、1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS15+5G>A、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G，MT‑RNR1 12S rRNA基因的1494C>T、1555A>G；所述快速文库构建方法，包括如下步骤：（1）使用针对所述20个突变位点的多重PCR引物对样本DNA进行目标区域扩增，以富集包含所述突变位点的目标区域；（2）在上一步的目标区域扩增产物中加入针对所述20个突变位点的分子倒置杂交探针，进行探针变性、退火反应；然后在恒温聚合酶、磷酸化酶和连接酶的存在下，进行延伸连接反应以将所述突变位点所在的缺口补齐形成单链环状文库；其中，所述分子倒置杂交探针的两端分别与待测突变位点上下游区域互补。
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