[发明专利]一株分泌马杜霉素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株SS0708及其应用

摘要

一株分泌马杜霉素（MD）特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株SS0708及其应用，属于免疫检测技术领域。本发明通过常规的细胞融合技术制备了一株鼠源的单克隆细胞株SS0708，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14687。该细胞株分泌的单克隆抗体采用间接竞争酶联免疫法测定，对MD的IC₅₀为3.75 ng/mL。该抗体可用于动物源食品中MD残留的免疫检测，满足目前市场上对MD快速免疫检测产品的需求。

主权项

1.一株能分泌马杜霉素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株SS0708，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14687；其所用抗原的合成方法为：采用活化酯法，将MD与载体蛋白KLH偶联得到的MD‑KLH作为免疫原，将MD与载体蛋白OVA偶联得到的MD‑OVA作为包被抗原；具体合成步骤如下：步骤1： 称取10mg MD，溶于3 mL 0.1 M pH 6.0的一水合 2‑（N‑吗啡啉）乙磺酸MES溶液中；不断搅拌下，先加入24mg N‑羟基琥珀酰亚胺，15 min 后，再加入31mg 1‑乙基‑3‑（3‑二甲基氨基丙基‑碳二亚胺）；在室温下，搅拌2h，得到活化液；步骤2：称取20mg KLH 或者OVA，溶于1mL 0.1 M pH 9.0碳酸盐缓冲溶液中；在不断搅拌下，逐滴加入活化液，室温下，反应4h后，将反应液用0.01 M pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析，即可得到MD‑KLH或者MD‑OVA。