[发明专利]一种结合AUDG和自避分子识别系统的环介导恒温扩增方法

摘要

本发明公开了一种结合南极热敏尿嘧啶脱氧核酸糖基化酶(AUDG)和自避分子识别系统(SAMRS)的环介导恒温扩增方法，所述方法对环介导恒温扩增中的引物3’端倒数第二位碱基至倒数第五位碱基的4个碱基进行SAMRS修饰，并在引物LF的5’端标记半抗原，在扩增系统中引入AUDG酶、脱氧尿嘧啶和生物素化的脱氧胞嘧啶，以环介导恒温扩增技术为基础，结合高分子纳米生物传感检测扩增产物。所述方法针对结核分枝杆菌复合群的IS6110特异序列的扩增产物能被高分子纳米生物传感器可视化检测。所述方法便捷、快速、敏感、特异，适宜于各种核苷酸片段检测。

主权项

一种环介导恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法包括以下步骤：(1)提取待检测样品的基因组；(2)提供在3’端的倒数第二位碱基至倒数第五位碱基的4个碱基被SAMRS修饰的引物，所述引物包括：SEQ ID NO：1所示的引物F3，SEQ ID NO：2所示的引物B3，SEQ ID NO：3所示的引物FIP，SEQ ID NO：4所示的引物BIP，SEQ ID NO：5所示的引物LF，SEQ ID NO：6所示的引物LB，其中，选择以上任一引物的5’端标记半抗原；(3)在南极热敏尿嘧啶脱氧核酸糖基化酶、链移位型聚合酶、解链温度调节剂、引物、dNTP，以及生物素化的脱氧胞嘧啶存在下，使用待检测样品的基因组核酸作为模板恒温扩增DNA；(4)使用高分子纳米生物传感器检测步骤(3)的扩增产物。