[发明专利]一种口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法

摘要

本发明涉及一种口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法，属于生物检测技术领域。该方法首先配制含有牙龈卟啉单胞菌的人工唾液，并针对口含型产品的使用特点，采用人工唾液模拟口含型烟草制品的使用过程，并对唾液的牙龈卟啉单胞菌含量进行荧光定量PCR分析，从而考察在使用口含型烟草制品前后唾液中的牙龈卟啉单胞菌含量的变化，为口含型烟草制品的口腔健康提供参考。本发明可以添加不同含量的牙龈卟啉单胞菌，模拟不同人口腔中牙龈卟啉单胞菌含量不同的实际情况，从而给予全方位的指导。

主权项

一种口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），配制人工唾液，并向人工唾液中添加牙龈卟啉单胞菌，使牙龈卟啉单胞菌在人工唾液中的量为1*104‑1*106CFU/mL，得到含牙龈卟啉单胞菌的人工唾液；步骤（2），采用步骤（1）得到的含牙龈卟啉单胞菌的人工唾液对口含烟烟草制品进行提取，提取多次，分别收集提取液；步骤（3），将步骤（2）收集到的各提取液与步骤（1）的含牙龈卟啉单胞菌的人工唾液一起放入厌氧培养箱于37℃下进行共培养；之后分别提取各培养液中的牙龈卟啉单胞菌DNA，同时提取牙龈卟啉单胞菌的标准菌株原始DNA；步骤（4），以浓度梯度稀释10倍的牙龈卟啉单胞菌的标准菌株原始DNA作为模板进行荧光定量PCR分析，之后绘制牙龈卟啉单胞菌荧光定量PCR标准曲线；同时，分别以各培养液中的牙龈卟啉单胞菌DNA作为模板进行荧光定量PCR分析，空白对照模板采用灭菌双蒸水，根据标准曲线计算各培养液中的牙龈卟啉单胞菌DNA的含量；其中，荧光定量PCR分析所使用的上游引物为5’‑tacccatcgtcgccttggt‑3’；下游引物为5’‑cggactaaaaccgcatacacttg‑3’；探针为FAM‑atttatagctgtaagataggc‑TAMRA。