[发明专利]一种苗期快速鉴定啤酒花植株雌雄性别的方法

摘要

本发明涉及细胞遗传学领域，具体涉及一种苗期快速鉴定啤酒花植株雌雄性别的方法，通过制备染色体玻片标本、CMA/DAPI染色、荧光检测、图像分析等步骤，重点解决了现有鉴别啤酒花雌雄株鉴定时期晚、复杂繁琐的分子生物学方法，提供一种简便、快捷、准确的方法。本发明提供的方法与单荧光染色发相比可以更好地显示啤酒花染色体的结构，特别是雌株和雄株的染色体核仁组织区形态结构。

主权项

1.一种苗期快速鉴定啤酒花植株雌雄性别的方法，包括下述步骤：染色体标本制作：(1)啤酒花植株根尖长至2‑3cm，且顶端圆润饱满；(2)切下生长旺盛的根尖2.5‑3mm，用饱和对二氯苯溶液4℃下处理20‑24h；(3)按照常规方式对根尖进行低渗和固定；(4)按照常规方式彻底清洗固定液；(5)用1％果胶酶Y‑23和4％纤维素酶Onozuka RS混合液，每个根尖15‑20μl酶液，37℃酶解90min；(6)吸取一个根尖到洗净晾干的载玻片上，体视镜下用解剖针去除根尖分生区以外的部位和杂质，轻轻敲碎根尖至浆状；(7)在根尖上滴加10‑15μl 60％冰乙酸，待液滴透明后滴加40‑50μl的卡诺固定液展片，将玻片置于80℃热台上干燥5‑8min；(8)于20倍相差显微镜下镜检，挑选出背景干净、分裂相较多的染色体片做下一步荧光染色；染色体双荧光染色：(1)将CMA滴加到染色体片上，80‑100μl/片，盖膜，避光孵育2h；(2)在磷酸缓冲液(PBS)中清洗3‑5min；(3)将DAPI滴加到染色体片上，80‑100μl/片，盖膜，避光孵育5min；(4)在磷酸缓冲液中迅速清洗后放入抗淬灭剂Citifluor AF1中，避光保存；(5)荧光显微镜下观察，B激发滤块下观察CMA染色的染色体，呈黄色荧光，U激发滤块下观察DAPI染色的染色体，呈蓝色荧光。