[发明专利]一种PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体三联灭活疫苗制备方法

摘要

本发明提供了一种PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体三联灭活疫苗制备方法，该技术方案基于三种微生物的生长特性及抗原物质的理化特征从培养、灭活、复配等层面设计了全新的制备方法。该方法中PCV2、PRRSV均采用生物反应器方式进行制备，抗原制备过程中严格控制发酵液的pH值，有效地保证了病毒的免疫原性；猪支原体通过细菌发酵罐生产菌种，菌种繁殖过程中通过溶氧、pH、转速等的设定，保证了批间菌液的均一性，消除了转瓶培养过程中操作繁杂、工作强度大、易污染等缺点，有效的提升了猪支原体灭活疫苗质量的稳定性。实验验证表明，本发明所制备的三联灭活疫苗对PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体保护率均超过80％，满足了三种病原的防治需求。

主权项

一种PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体三联灭活疫苗制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)制备病毒含量≥107.9TCID50/mL的猪圆环病毒2型病毒液，在搅拌状态下向其中加入终浓度为0.05％(w/v)的β‑丙内酯，置2～8℃条件下搅拌灭活48小时，然后置37℃水解2小时，得到灭活的猪圆环病毒2型病毒液；2)制备病毒含量≥107.0TCID50/0.1mL的猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒液，在震荡条件下向其中加入甲醛溶液至其中甲醛终浓度为0.3％(v/v)，于37℃保持48小时，过程中振摇3～4次，得到灭活的猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒液；3)制备菌体含量为109～1010CCU/mL的猪肺炎支原体溶液，在震荡条件下向其中加入甲醛溶液至其中甲醛终浓度为0.3％(v/v)，于37℃保持48小时，过程中振摇3～4次，得到灭活的猪肺炎支原体溶液；4)将步骤1)所述灭活的猪圆环病毒2型病毒液、步骤2)所述灭活的猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒液、步骤3)所述灭活的猪肺炎支原体溶液三者等体积混合，得到混合抗原溶液，将所述混合抗原溶液与油佐剂按7:3的体积比混合，而后以500～800r/min的转速搅拌30～40分钟，在终止搅拌前加入终浓度为0.01％(w/v)的硫柳汞，混匀，即得到所述PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体三联灭活疫苗。