[发明专利]一种PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体三联灭活疫苗制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，进一步涉及多联疫苗的制备技术，具体涉及一种PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体三联灭活疫苗制备方法。

背景技术

猪圆环病毒2型(PCV2)被认为是引起以严重消瘦、淋巴结肿大和呼吸道症状为特征，断奶仔猪多系统消瘦衰竭综合征(PMWS)的病因。猪圆环病毒感染主要特征还表现为体质下降、消瘦、贫血、黄疸、生长发育不良、腹泻、呼吸困难、母猪泛指障碍、内脏器官及皮肤的广泛病变，特别是肾、脾脏及全身淋巴结的高度重大、出血、坏死等症状，给养猪业带来巨大的经济损失。PCV2和其他病原的混合感染经常被报道，例如猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒和副猪嗜血杆菌、猪链球菌等，危害严重。目前市场上广泛应用的灭活苗毒株有PCV2WH株、LG株、DBN-SX07株、ZJ/C株和SH株。自从2006年PCV2疫苗应用以来，很多临床研究明确地展示了疫苗的良好效果，相比较于非免疫的猪群，疫苗应用能显著提高猪群平均日增重(ADG)和饲料转化率(FCR)，并且减少了死亡率和淘汰率。

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也是严重影响全球养猪业的重要病原，可致母猪繁殖障碍、生长猪的呼吸道疾病和细菌继发感染。目前在大多猪场都有该病毒感染和病原存在，该病毒由于引起免疫抑制、高度变异性、病毒的增殖呈现抗体依赖性增强，引起典型的生殖道与呼吸道症状，并容易造成继发感染与混合感染，损失较重。猪繁殖与呼吸综合征使用的活疫苗被分为两种：一种是自然致弱的活疫苗，比如R98、Ch-1a、VR2332株；另一种是在通过连续传代致弱的HP-PRRSV基础上研制的活疫苗，例如JX-1a、HuN4、TJM-F92和GDr-180株。猪蓝耳病的预防策略是根据养猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒情况制定的，该病的弱毒疫苗免疫预防是一把双刃剑，阴性猪场是不必要进行疫苗接种的，而爆发过猪蓝耳病的猪场则必须接种，而灭活疫苗主要的优点是安全，不会传染给其他猪只，同时也不会遇到毒力返强的情况。

猪支原体肺炎是一种低死亡率、高发病率的慢性细菌性疾病。疾病的发生发展与Mhp的毒力强弱及在气管、支气管粘膜上的感染程度相关，通过电子显微原观察到，在感染的早期支原体主要存在器官、支气管和细支气管的粘膜表面，而支气管末端及肺泡内则少见。支原体表面有粘附素，最先粘附于气管纤毛表面，随着纤毛的蚕食和脱落，支原体进入气管末端和肺泡中，逐渐形成肺肉变或胰样变，最后使肺脏功能遭到破坏出现呼吸系统症状。该病不仅影响猪的生长性能，如平均日增重和饲料转化率，而且能够提高继发性肺炎的易感性。疫苗接种被用来提前免疫，灭活疫苗对猪安全，无副作用，可使免疫猪肺炎程度下降40％及以上。

现有技术中，针对上述病原的疫苗产品普遍为单成分疫苗或二联疫苗，因此难以实现同时免疫猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒以及猪支原体肺炎三种病原的目的。有研究者尝试利用上述三种抗原制备三联疫苗，但由于三种微生物的生物学特性不同，抗原的物质基础不同，因此采用常规制备方法难以保证产品三种免疫原性均达到较高水平，而且，鉴于三种抗原溶液的成分不同，后续复配工艺需要考虑到全部的大分子杂质类别以及三种抗原的自身特性。对于以上问题，现有技术尚未取得理想的研究成果，因此现有技术中上述三联疫苗在保护效力、不良反应等方面仍有待改善。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体三联灭活疫苗制备方法，以解决现有技术中缺乏一种能同时免疫猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒以及猪支原体肺炎三种病原的疫苗的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是，在以PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体为抗原的三联疫苗制备过程中，如何产品的保护效力、降低不良反应发生率。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体三联灭活疫苗制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)制备病毒含量≥10^7.9TCID₅₀/mL的猪圆环病毒2型病毒液，在搅拌状态下向其中加入终浓度为0.05％(w/v)的β-丙内酯，置2～8℃条件下搅拌灭活48小时，然后置37℃水解2小时，得到灭活的猪圆环病毒2型病毒液；