[发明专利]特异性示踪内皮细胞分化的hESC指示细胞系的构建方法有效
| 申请号： | 201710894222.6 | 申请日： | 2017-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN107805627B | 公开（公告）日： | 2020-11-06 |
| 发明（设计）人： | 梁德生;胡志青;邬玲仟 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/63 |
| 代理公司： | 长沙正奇专利事务所有限责任公司 43113 | 代理人： | 卢宏;周栋 |
| 地址： | 410083 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种特异性示踪内皮细胞分化的hESC指示细胞系的构建方法，该方法包括如下步骤：(1)构建质粒CD144N‑GFP；(2)构建质粒TALENs，所述质粒TALENs包括质粒CD144N‑L2和质粒CD144N‑R2；(3)将质粒CD144N‑GFP和质粒TALENs同时核转ESCs，经过G418筛选，挑取单克隆之后，利用跨5’同源臂引物F1/R1及跨3’同源臂引物F2/R2进行PCR初步鉴定，鉴定双侧阳性者进行Southern blot鉴定，利用Kpn I酶切，长同源臂上探针进行杂交鉴定，阳性者即为特异性示踪内皮细胞分化的hESC指示细胞系。 | ||
| 搜索关键词： | 特异性 内皮 细胞 分化 hesc 指示 细胞系 构建 方法 | ||
【主权项】：
特异性示踪内皮细胞分化的hESC指示细胞系的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)构建质粒CD144N‑GFP，所述质粒CD144N‑GFP的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；(2)构建质粒TALENs，所述质粒TALENs包括质粒CD144N‑L2和质粒CD144N‑R2，所述质粒CD144N‑L2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述质粒CD144N‑R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；(3)将质粒CD144N‑GFP和质粒TALENs同时核转ESCs，经过G418筛选，挑取单克隆之后，利用跨5’同源臂引物F1/R1及跨3’同源臂引物F2/R2进行PCR初步鉴定，鉴定双侧阳性者进行Southern blot鉴定，利用Kpn I酶切，长同源臂上探针进行杂交鉴定，阳性者即为特异性示踪内皮细胞分化的hESC指示细胞系；其中，所述跨5’同源臂引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述跨5’同源臂引物R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述跨3’同源臂引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述跨3’同源臂引物R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
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