[发明专利]一种激活和扩增NKT细胞的方法

摘要

本发明公开了一种激活和扩增NKT细胞的方法，包括以下步骤：步骤1：从外周血中分离出PBMC细胞；步骤2：将分离出的PBMC细胞经培养基重悬后，转移至经抗人CD3抗体和重组人纤连蛋白包被过的培养容器中，并向培养基中加入IFN‑γ后进行培养；步骤3：向培养基中继续加入维生素C、人血清白蛋白、IL‑2和OK432后继续培养，得到NKT细胞。本发明能显著的提高NKT细胞的纯度和与产量；且本发明提供的NKT培养方法操作简单，所耗费的成本也比较低。在培养NKT细胞的起始阶段使用CD3抗体和纤连蛋白，这能够很大程度的提高NKT的诱导效率。在NKT细胞的培养基里面加入IFN‑γ和OK432，可以显著的增加NKT细胞的杀伤能力，而且OK432能明显的促进NKT细胞的增殖能力。

主权项

1.一种激活和扩增NKT细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：从外周血中分离出PBMC细胞；步骤2：将分离出的PBMC细胞经培养基重悬后，转移至经抗人CD3抗体和重组人纤连蛋白包被过的培养容器中，并向培养基中加入IFN‑γ后进行培养；所述培养容器使用1.5毫升含有20μg/ml的CD3单抗和5μg/ml重组人纤连蛋白的无血清培养基进行包被；所述IFN‑γ的终浓度到达1000U/ml；步骤3：24小时以后，向培养基中继续加入维生素C、人血清白蛋白、IL‑2和OK432，保证维生素C的终浓度为10μg/ml、人血清白蛋白的终浓度为0.5mg/ml、OK432的终浓度为1μg/ml和IL‑2的终浓度为1000U/ml；细胞继续培养2天以后，补加30‑50％体积的无血清培养基，该无血清培养基含有10μg/ml的维生素C、0.5mg/ml的人血清白蛋白和1000U/ml的IL‑2；平均每两天补液一次，随着培养液体积的增多，再把细胞转移到没有被包被过的培养容器中培养；一共培养21天，得到NKT细胞。