[发明专利]一种基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种基于AuPdCu/N‑GQDs@PS的免疫传感器的制备方法及应用。采用基于AuPdCu/N‑GQDs@PS构建电化学免疫传感器，实现了对乙型病毒性肝炎标志物的检测，具有特异性强，灵敏度高，检测限低等优点，对乙肝疾病的检测具有重要的科学意义和应用价值。

主权项

1.一种基于AuPdCu/N‑GQDs@PS的免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下几个步骤：（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（2）取6 µL、2.0 ~ 4.0 mg/mL的AuPdCu/N‑GQDs@PS溶液滴加到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL乙型肝炎表面抗体anti‑HBs溶液滴加到电极表面，4 ℃冰箱中晾干；（4）继续将3 µL、0.5 ~ 1.5 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；（5）将6 µL、10 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的乙型肝炎表面抗原HBsAg溶液滴涂在电极上，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干，制得一种基于AuPdCu/N‑GQDs@PS的免疫传感器；所述AuPdCu/N‑GQDs的制备，步骤如下：①N‑GQDs的制备：2 g柠檬酸和1 g的双氰胺混合，加入5 mL超纯水，然后，将混合物转移到25 mL的不锈钢高压反应釜中，在反应温度160 ~ 200 ℃，加热10 ~ 14 h，最终将产品分散在100 mL超纯水中，以10000 rpm转速，离心10 min，除去粒径大的粒子，收集上清溶液，得到N‑GQDs；②AuPdCu/N‑GQDs的制备：13.9 mg氯化铜，10.6 mg氯化钯和0.5 mL质量分数为1%的氯金酸溶解在2.5 mL、0.5 mol/mL的盐酸中，超声30 min，然后将3 ~ 7 mL、20 mg/L的N‑GQDs溶液混合至上述溶液中，在磁力搅拌下用氢氧化钠调节pH为10，将混合物转移至高压反应釜中，反应温度160 ~ 200 ℃，反应时间为4 ~ 8 h，得沉淀物，以8000 rpm转速，每次10 min离心洗涤3次，25 ℃真空干燥12 h，得到AuPdCu/N‑GQDs；所述PS和AuPdCu/N‑GQDs@PS的制备，步骤如下：①PS的制备：5 mg的1,1'‑二茂铁二甲酸FcCOOH溶解于5 mL甲醇中，超声分散至均匀，然后将溶液暴露在阳光下照射1 ~ 3 h，在阳光的照射下分解为缺质子化的Fc‑COO^–和Fe³⁺，配位聚合后，溶液颜色由黄色变为褐色，产生沉淀，离心，用乙醇洗涤三次，25 ℃真空干燥6 h，将PS保存在pH = 6.98的PBS中备用；②AuPdCu/N‑GQDs@PS的制备：AuPdCu/N‑GQDs通过静电引力固定在PS上，首先，1.0 mL带负电荷的PS溶液和1.0 ~ 3.0 mL带正电荷的聚乙烯亚胺溶液分散在5.0 mL超纯水中，震荡1 h，离心分离得到带正电荷的PS溶液，再加入0.5 ~ 1.5 mL制备好的带负电荷的AuPdCu/N‑GQDs溶液，震荡1 h，然后用超纯水离心洗涤，25 ℃真空干燥12 h，得到AuPdCu/N‑GQDs@PS。