[发明专利]一种基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫传感器的制备方法及应用

说明书

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种基于AuPdCu/N‑GQDs@PS的免疫传感器的制备方法及应用。采用基于AuPdCu/N‑GQDs@PS构建电化学免疫传感器，实现了对乙型病毒性肝炎标志物的检测，具有特异性强，灵敏度高，检测限低等优点，对乙肝疾病的检测具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明涉及一种基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫传感器的制备方法及应用，属于新型功能纳米材料、免疫分析以及生物传感检测技术领域。

背景技术

目前，在世界范围内仍有许多疾病困扰着人类，其中由乙型肝炎病毒（HBV）引起的乙型病毒性肝炎在发展中国家发病率高，严重威胁着人类的健康。据统计，全世界无症状乙肝病毒携带者超过2.8亿，其中我国约占1.3亿。乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是HBV感染后第一个出现的血清学标志物，也是诊断乙肝炎的重要指标之一，由于乙型病毒性肝炎的特点为起病较缓，不易被发现，因此在临床研究上，采用快速、简便、灵敏地检测的方法对乙型病毒性肝炎的早期诊断、预防和治疗具有十分重要的意义。

目前对于乙型肝炎表面抗原的检测方法很多，如目前常用于检测HBsAg的免疫分析方法主要包括酶联免疫吸附方法、放射免疫法、荧光标记物方法和电化学发光免疫分析方法等，但多数检测方法繁琐，操作复杂，费用昂贵，检出限高。因此，建立一种快速、简便、灵敏的检测方法具有重要的临床意义。

免疫传感器是将免疫学方法与分析化学方法相结合的一种生物传感器，通过抗原与抗体之间的特异性结合，使它具有灵敏度高、选择性好、结构简单、操作简便、易于小型化、可连续、快速自动化检测分析等优点。在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。构建电化学免疫传感器的关键有两点：其一是采用简单、快速、有效的方法将抗原抗体等活性生物分子固定在电极表面；其二是开发传感器的信号放大技术。

以1,1'-二茂铁二甲酸（FcCOOH）作为前驱物合成的聚合物纳米微球（PS），具有良好的生物相容性及导电性，能够很好的固定抗体并加速电子传递，且具有较大的比表面积，能够有效地负载氮掺杂石墨烯量子点功能化金钯铜三合金(AuPdCu/N-GQDs)；氮掺杂石墨烯量子点（N-GQDs）有丰富的含氧基团，具有良好的水溶性，与金钯铜三合金纳米粒子（AuPdCu NPs）产生良好的协同作用，合成的AuPdCu/N-GQDs具有良好的催化性能，对于提高传感器灵敏度具有重要作用。

本发明提供了一种基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫传感器的制备方法及应用，实现了对乙型肝炎病毒标记物的灵敏检测。

发明内容

本发明的目的之一是基于功能性纳米材料AuPdCu/N-GQDs@PS，构建了一种快速超灵敏的无标记型电化学免疫传感器。

本发明的目的之二是将基于AuPdCu/N-GQDs@PS构建的无标记型电化学免疫传感器应用于乙型肝炎病毒标记物的检测。

本发明的技术方案如下：

1. 一种基于AuPdCu/N-GQDs@PS的免疫传感器的制备方法，其制备步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）取6 µL、2.0 ~ 4.0 mg/mL的AuPdCu/N-GQDs@PS溶液滴加到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL乙型肝炎表面抗体anti-HBs溶液滴加到电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

（4）继续将3 µL、0.5 ~ 1.5 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；