[发明专利]利用Cas9切割核酸酶介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法在审
| 申请号： | 201710855259.8 | 申请日： | 2017-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN107619837A | 公开（公告）日： | 2018-01-23 |
| 发明（设计）人： | 张涌;袁梦珂;高元鹏;韩静;马晓楠;吴腾 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司61200 | 代理人： | 范巍 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用Cas9切割核酸酶介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法，本发明通过电穿孔的方法将供体载体和针对打靶位点的CRISPR/Cas9表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，供体载体中MSR1启动子可以使Ipr1实现在专职吞噬性细胞中的特异性表达，嘌呤霉素药物筛选后，经过PCR鉴定获得打靶的阳性克隆细胞。以该转基因阳性克隆细胞为核供体，获得转基因克隆胚胎，进一步将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫内，最终获得成活的Ipr1定点插入转基因克隆牛。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 cas9 切割 核酸酶 ipr1 定点 插入 获取 转基因 胎儿 纤维 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种Ipr1巨噬细胞特异性表达打靶载体，其特征在于：该打靶载体包括目的基因Ipr1以及用于将Ipr1基因通过同源重组定点插入牛25号染色体FSCN1和ACTB基因间的元件序列。
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