[发明专利]一种检测贝氏柯克斯体的重组酶聚合酶恒温扩增方法、专用引物和探针及应用

摘要

本发明提供了用于检测贝氏柯克斯体的RPA检测方法，其专用引物、探针及其在贝氏柯克斯体检测中的用途。所述检测方法、其专用引物和探针及基于贝氏柯克斯体23S rRNA基因保守序列设计，具有SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的寡核苷酸序列。本发明首次将新型恒温扩增技术RPA应用于贝氏柯克斯体的检测中，该方法模拟体内DNA复制的酶反应过程，依赖特定的酶和蛋白组合，包括重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶，对DNA模板进行扩增，可在25‑43℃的恒温下实现特定核酸序列的扩增，扩增产物可通过侧向层析试纸条实现可视化判别。本发明具有高灵敏度、高特异性，且对硬件设备的要求很低，且反应时间短，无需对样品进行复杂处理、适合现场检测等优点，适于推广应用。

主权项

1.一种用于检测贝氏柯克斯体的RPA专用引物，是根据贝氏柯克斯体23S rRNA基因保守序列设计的，所述贝氏柯克斯体23S rRNA基因保守序列具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；SEQ ID NO.1：AATTAACCGTTGTAGTTACGTAAATAAACTTGGCTATATGCTGGAAACTCCGAGTATCCTCCAGTACTCATCTCAACTAAAATTGAGGTAGTAAAAATCTGCGAGGTGCGGACAATCAGCAGGAAAGACTAATCTTTTTGATTAGAATCCTCAGAGACTAATACGCCGAGCGTACTTAGAAAAAATCCATTCTAAGTGTGATGATAGAGTCCGATCTCTATAGCGATATAGAGGGTTTTCAAAAGAAACCTGTTAATCATTATCCCATGATTAACATAACGTCAATAAACGGTCCTAAGGTAGCGAAATTCCTTGTCGGGTAAAAAATTGCCCCGCTAAACTGTAAAGTTTAGTGATAAAGTCAGCTCATATCGGGGGAACCCTCCTGCTTTTTAGCAAAGGGCAATCCCGAGGGAAGTCTTAAATGACCCCGTAACGACTGATCCGAAAGGTGAGGCACGCATTTGTGTGCAATACGCTGACTTCTTGCCCTTGGGTTTATACTCAAGAAGTAAGTGACTATGGAGAATTTATTTATGTATTTACATTTAGAGCCATGGTATGTAAGTGGTTTAACAGAAGGAGAAGGGTGTTTTTCGATATCATTTAACTTCAGAAAAAAGTTAAAAATTGGTATTGAAACAAGACCATCTTTTTCCATCACGTTAAATCAAAGAGATTTACCTCTCTTAAAAGAGATACATTCGTTTTTTGAATGTGGAGCAATTAGATTTTCACGAGGGGATCGTACGTATAAATATGAAGTCCGTTCCGTAAAAGATCTTGTGAAGCGAATAATTCCACACTTCGATAACTATCCTCTTAGAGGAGGTAAACAAAAAGATTTTCGATATTTTTCTGAAATCTGTAAAAAAATACATACCAATTTTCATTTAAATAAACAACATTTAATTGAAATAATAAAAATGGCTTATCTGATGAATCCATCAGGTAAACGTAGGCATGAAATAAATGATCTCCTAAGGTTGCTTGGTGAGAAAATGGTATAGTCTACTCCCTATGGAAACATAGGAAAGAGTGA 。