[发明专利]一种基于G-四联体核酸适配体荧光探针检测牛奶中环丙氨嗪的方法

摘要

本发明公开了一种基于G‑四联体核酸适配体荧光探针检测牛奶中环丙氨嗪的方法。当检测体系中没有环丙氨嗪时，修饰在适配体上的荧光素FAM会在520nm处释放出荧光；当体系中加入环丙氨嗪后，环丙氨嗪和功能核酸上的胸腺嘧啶结合，促进功能核酸形成G‑四联体结构，抑制了520nm处的荧光释放，基于释放出的荧光信号与环丙氨嗪浓度呈反比，通过测定荧光信号可实现牛奶中环丙氨嗪的定量检测。本方法可用于牛奶中环丙氨嗪的检测，检测灵敏度高，最低检测限0.68ppb，选择性好，操作简便，前处理简单，不需要大型仪器。

主权项

一种基于G‑四联体核酸适配体荧光探针检测牛奶中环丙氨嗪的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)将若干相同浓度的检测液和若干经前处理的添加了不同浓度环丙氨嗪标准液的牛奶样品在24～26℃的温度下，混合2min后，得到环丙氨嗪含量维持在0‑10ppb之间的标准溶液；其中：所述检测液由Tris‑乙酸缓冲液将FAM修饰的核酸适配体稀释得到，所述FAM修饰的核酸适配体为5’‑FAM‑GGTTGGTTGGTTGGTTTT‑3；(2)取上述制备的标准溶液，置于比色皿中，设置激发波长为480nm后，用荧光分光光度计测定其在520nm处的荧光强度；检测体系中存在环丙氨嗪测得的荧光强度记作F，不存在环丙氨嗪测得的荧光强度记作F0，计算淬灭率(F0‑F)/F0；(3)将不同浓度的环丙氨嗪与对应的淬灭率(F0‑F)/F0作图，绘制标准曲线；(4)将待检测牛奶样品前处理后，与步骤(1)相同浓度的检测液混合，充分混匀后反应1～3min，用荧光分光光度计在480nm的激发波长下测试混合液在520nm处的荧光强度，再计算其淬灭率(F0‑F)/F0；(5)根据待检测牛奶样品的淬灭率(F0‑F)/F0，查标准曲线，求得待检测牛奶样品中环丙氨嗪含量。