[发明专利]一种测定毛发中吡咯加合物含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定毛发中吡咯加合物含量的方法，通过筛选不同消化方法，最终确定用0.075g毛发加0.72mol/L NaOH 5ml混匀，56℃水浴加热1h溶解，然后用浓盐酸调至pH8，再加入2％胰酶至10ml，继续加热消化1h，得消解液；然后建立标准曲线，用4‑(二甲氨基)苯甲醛定量测定毛发中吡咯加合物含量。采用本发明的方法，毛发的最低检出限为0.07±0.01nmol/mg蛋白。本发明的测定毛发中吡咯加合物含量的方法可用于测定正己烷、2,5‑己二酮引起的慢性中毒。

主权项

1.一种测定毛发中吡咯加合物含量的方法，其特征在于，步骤如下：(1)处理毛发样品得毛发样品消解液；所述毛发的处理方法为：A.毛发样品的前处理将毛发样品与清洁剂和热水混匀并搅拌，再用无水乙醇浸泡脱脂处理，静置室温干燥；B.消化处理向前处理后的毛发样品中加入NaOH溶液，混匀，水浴加热溶解，然后调至pH＝8；再加入胰酶溶液继续加热消化0.5‑1.5h，得毛发样品消解液；(2)将毛发样品消解液离心，取上清中间液，加入盐酸胍、无水乙醇和埃利希试剂，震荡后测定吸光度值，利用内标工作曲线测定毛发样品消解液中吡咯加合物浓度；(3)测定毛发样品消解液中蛋白质的含量；(4)按C₃＝C₁/C₂nmol/mg计算毛发样品中吡咯加合物的含量；其中，C₁为毛发样品消解液中吡咯加合物浓度，计算方法为：C₁＝(OD₁‑0.0612)/0.0048nmol/ml；OD₁为毛发样品消解液在526nm处测定的吸光值；C₂为毛发样品消解液中蛋白质浓度，计算方法为：C₂＝(OD₂‑0.158)/0.0011*10/1000mg/ml；OD₂为毛发样品消解液在562nm处测定的吸光值；C₃为毛发样品中吡咯加合物的含量。