[发明专利]一种测定毛发中吡咯加合物含量的方法

说明书

本发明公开了一种测定毛发中吡咯加合物含量的方法，通过筛选不同消化方法，最终确定用0.075g毛发加0.72mol/L NaOH 5ml混匀，56℃水浴加热1h溶解，然后用浓盐酸调至pH8，再加入2％胰酶至10ml，继续加热消化1h，得消解液；然后建立标准曲线，用4‑(二甲氨基)苯甲醛定量测定毛发中吡咯加合物含量。采用本发明的方法，毛发的最低检出限为0.07±0.01nmol/mg蛋白。本发明的测定毛发中吡咯加合物含量的方法可用于测定正己烷、2,5‑己二酮引起的慢性中毒。

技术领域

本发明涉及吡咯加合物的含量测定技术领域，具体涉及一种测定毛发中吡咯加合物含量的方法。

背景技术

正己烷(n-hexane，CH₃(CH₂)₄CH₃)，是一种常用的饱和脂肪烃类工业溶剂，主要用于粘胶配制、除污、干洗、植物油提取、制鞋、印刷、油漆、制药、家具制造及电子元件制造等行业。近年来，在我国正己烷诱发的职业中毒事件时有发生，长期慢性低浓度接触可出现周围神经病变。患者主要表现为感觉运动神经功能减弱，手足发麻无力，感觉减退，严重者可表现为肌肉萎缩、双下肢瘫痪。

正己烷导致慢性周围神经病变的机制至今尚不清楚，现存在多种假说，其中正己烷代谢物-----2,5-己二酮(2,5-hexandione，2,5-HD)与神经丝等蛋白质结合形成吡咯加合物(Pyrrole adducts)使得神经轴索变性的假说受到大多数研究者的认同。因此，研究吡咯加合物成为研究正己烷中毒的重点，但有关吡咯加合物的文献报道较少，Kessler W等人曾发现吡咯加合物能与埃利希试剂反应后呈现特异性紫红色，通过测定光密度可计算吡咯加合物浓度。

对于吡咯加合物的检测样本，目前多采用动物的血液和尿液样本。但由于血液和尿液样品不易保存，半衰期较短，尿液酸化时可使含量上升等缺点，因此，需要寻找更好的样本用于吡咯加合物的检测。

毛发样本由于其自身的稳定性和可蓄积性，逐渐成为一个较好的生物标志物，目前已用于监测重金属蓄积和违禁药品使用。考虑到血液中的2,5-HD可能与毛发中的蛋白质结合并蓄积，以及毛发样本的收集简单，储存方便，能较好的反应机体的蓄积情况的特点。因此，以毛发作为检测样本用于吡咯加合物的含量测定，可以为预防正己烷中毒提供新的监测手段。但目前还未有关于测定毛发中吡咯加合物含量的报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种测定毛发中吡咯加合物含量的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种用于吡咯加合物含量测定的毛发样品的处理方法，步骤如下：

(1)毛发样品的前处理：

将毛发样品与清洁剂和热水混匀并搅拌，再用无水乙醇浸泡脱脂处理，静置室温干燥；

(2)消化处理：

向前处理后的毛发样品中加入NaOH溶液，混匀，水浴加热溶解，然后调至pH＝8；再加入胰酶溶液继续加热消化0.5-1.5h，得毛发样品消解液。

优选的，步骤(1)中，毛发样品与清洁剂加入量的比为1g：(0.1-0.2)ml。

优选的，步骤(1)中，无水乙醇浸泡脱脂处理的次数为2次。

优选的，步骤(2)中，所述NaOH溶液的浓度为0.72mol/L；前处理后的毛发样品与NaOH溶液加入量的比为0.075g：5ml。

优选的，步骤(2)中，水浴加热的温度为56℃，水浴加热的时间为1h。

优选的，步骤(2)中，采用12mol/L的浓盐酸滴定至pH＝8。