[发明专利]一种凹叶木兰的有性繁殖研究方法

摘要

本发明公开了一种凹叶木兰的有性繁殖研究方法，该方法包括以下步骤开花结实的物候观察；开花动态观察；单花花粉量及花粉形态大小测定；花粉活力测定；柱头可受期测定。该方法通过对凹叶木兰的开花物候、开花时花被片和雌雄蕊的动态变化、花粉维持活性的时间和柱头可受期的研究，探讨凹叶木兰的开花生物学特性和繁育系统。

主权项

一种凹叶木兰的有性繁殖研究方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、开花结实的物候观察在麻咪泽自然保护区，设置19个样地，按照人为干扰程度将样地的生境划分为村庄附近，放牧地，原始森林和人工林；连续两年于样地内进行凹叶木兰花期物候观测；按照Dafni 1992的标准记录开花进程并记录开始的时间，当个别植株开始开花时为始花期，50％以上的植株开花时为盛花期，少于10％的植株仍在开花为末花期；记录样地的海拔高度和经纬度；于第一年9月在美姑大风顶自然保护区，次年10月在雷波麻咪泽保护区和冕宁冶勒自然保护区，第三年10月在冕宁冶勒自然保护区进行凹叶木兰结实特性的调查，纪录每株凹叶木兰的结实数量，并测量结实的个体的高度和胸径；步骤2、开花动态观察从现蕾开始，随机标记凹叶木兰10朵花，每隔3个小时观察1次，记录花蕾的生长变化状态和开花动态，同时记录观察的时间、天气、湿度、温度；步骤3、单花花粉量及花粉形态大小测定从3株样树上随机选取外轮花被片已张开但雄蕊还未散粉的花20朵，固定于FAA溶液中带回实验室；在室内统计每朵花的花药数目后，从每朵花上随机选取5枚花药，用1.0mL/L HCl软化花药壁，解剖花药，将全部花粉移入装有蒸馏水的烧杯中，仔细清洗花药壁、镊子和刀片，清洗液也移入离心管，定容至100mL，振荡器下振荡60s，制成花粉粒悬浮液，用微量进样器取10μL花粉液于载玻片上，在显微镜下观察并统计花粉数，重复10次，取其平均值乘以10000算出5枚花药的花粉粒总数，并算出单花花粉量和平均单花花粉量；接着将该花的子房置于载玻片上于解剖镜下解剖剥离，统计胚珠数；每一朵花的花粉胚珠比用单花中的花粉量除以单花子房中的胚珠数的方法统计；在显微镜下观察木兰花粉的形态，用测微尺测量每朵花20粒花粉的大小；统计数据用平均值±标准误差表示，n表示样本量；步骤4、花粉活力测定在三棵样树上共选取10朵外轮花被片已开放至平展状态的花朵，采下带回室内水插，从其自然散粉开始到衰败时定期1h、2h、3h、4h、8h、1d、2d、3d取花粉测定；将花粉样品置于载玻片上，加1‑2滴0.5％TTC蔗糖溶液，在室温下放置10‑15分钟后，用显微镜在同一张玻片的3个不同视野观察并统计花粉中红色花粉数所占总花粉数的比例，重复3次，取平均值；步骤5、柱头可受期测定人为将凹叶木兰花朵或花蕾分为I‑IV个时期，取不同发育时期的花的花柱各20个，来源于不同的5朵花，每朵花取4个柱头，在凹形载玻片内，用MTT溶液对柱头进行检测。