[发明专利]一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法

摘要

一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，属于沥青制备技术领域，包括铜绿假单胞菌接种于斜面培养基、接种于种子培养基、等离子体诱变、接种于平板培养基、接种于发酵培养基、乙酸萃取、制备乳化沥青。鼠李糖脂具有较强的表面活性和乳化能力，能被生物完全降解，对环境友好。采用本发明制备的等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青，乳化效果好、稳定性好，具有良好的降滤失性和抑制性。采用等离子体作为诱变剂，对铜绿假单胞菌菌株进行诱变处理，获得鼠李糖脂的产量更高。

主权项

一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：铜绿假单胞菌接种于斜面培养基上，置于培养箱中，培养温度37℃，培养24h；步骤二：将斜面培养基上的菌落接到种子培养基，37℃、摇床转速200r·min‑1，培养24h；步骤三：利用接种针将种子培养基上的菌落轻刮进装有50L生理盐水的容器中，置于摇床中震荡30min后，用塞有无菌脱脂棉的漏斗过滤，吸取10mL滤液于无菌培养皿中，采用常压室温等离子体诱变处理2min，然后利用生理盐水稀释至8％(v/v)，将稀释液均匀涂布于平板培养基上，37℃下，平板培养4d；步骤四：挑取平板培养基上的菌落置于发酵培养基中，并于37℃、250rpm的摇床中培养4天后，得发酵液；步骤五：取发酵液，在25℃、10000rpm的条件下离心处理3min，用移液枪吸取上清液到容器中，再加入5倍体积的乙酸萃取，用旋涡振荡器混匀，静置24h后，将上层有机相抽提到容器中，并将其放入通风厨中待乙醚挥发完全，得鼠李糖脂；步骤六：称取2g沥青、2ml鼠李糖脂加入容器中，并用滴管将100ml水缓慢滴加置容器中，并用搅拌机以600r/min的速度不停搅拌，混合均匀。