[发明专利]一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法

权利要求书

1.一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：铜绿假单胞菌接种于斜面培养基上，置于培养箱中，培养温度37℃，培养24h；

步骤二：将斜面培养基上的菌落接到种子培养基，37℃、摇床转速200r·min^-1，培养24h；

步骤三：利用接种针将种子培养基上的菌落轻刮进装有50L生理盐水的容器中，置于摇床中震荡30min后，用塞有无菌脱脂棉的漏斗过滤，吸取10mL滤液于无菌培养皿中，采用常压室温等离子体诱变处理2min，然后利用生理盐水稀释至8％(v/v)，将稀释液均匀涂布于平板培养基上，37℃下，平板培养4d；

步骤四：挑取平板培养基上的菌落置于发酵培养基中，并于37℃、250rpm的摇床中培养4天后，得发酵液；

步骤五：取发酵液，在25℃、10000rpm的条件下离心处理3min，用移液枪吸取上清液到容器中，再加入5倍体积的乙酸萃取，用旋涡振荡器混匀，静置24h后，将上层有机相抽提到容器中，并将其放入通风厨中待乙醚挥发完全，得鼠李糖脂；

步骤六：称取2g沥青、2ml鼠李糖脂加入容器中，并用滴管将100ml水缓慢滴加置容器中，并用搅拌机以600r/min的速度不停搅拌，混合均匀。

2.根据权利要求1所述的一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，其特征在于：步骤六中所述的滴加水的速度控制在10mL/min。

3.根据权利要求1所述的一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，其特征在于：步骤一中所述的斜面培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，包含：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、琼脂20g/L。

4.根据权利要求1所述的一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，其特征在于：步骤四中所述的发酵培养基包含：K₂HPO₄ 4g/L、KH₂PO₄ 4g/L、KCL1g/L、NaNO₃ 2.5g/L、NaCL1g/L、CaCl₂·2H₂O 0.1g/L，MgSO₄ 0.2g/L，酵母粉1g/L，甘油30v/v。

5.根据权利要求1所述的一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，其特征在于：步骤三中所述的平板培养基包含：葡萄糖20g/L、硝酸铵2.5g/L、酵母膏0.05g/L、磷酸二氢钾10g/L、磷酸氢二钠4g/L、琼脂20g/L。

6.根据权利要求1所述的一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，其特征在于：步骤二中所述的种子培养基包含：NaClg/L，胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L。