[发明专利]从胎盘分离间充质干细胞的方法和使用的消化酶组合物

摘要

本发明涉及从胎盘分离间充质干细胞的方法和使用的消化酶组合物。具体的说，所述方法包括(a)取胎盘小叶，用PBS缓冲液充分冲洗，以去除胎盘中残留的血液；(b)将胎盘小叶剪成块状，加入含有组织消化酶的PBS缓冲液，再在37℃孵育消化；(c)将组织块用铜网过滤，必要时研磨以促使过滤；(d)将收集的过滤液离心，分离单个核细胞，再用MSC培养基悬浮所获得的细胞，然后在37℃、5％CO₂培养箱中培养；(e)待散在细胞形成克隆后，挑取各克隆细胞，用MSC培养基分别培养，待细胞融合后，用胰酶消化传代，即得胎盘间充质干细胞。通过本发明方法可以获得高纯度的胎盘间充质干细胞，并且成本低廉，细胞收率高。

主权项

1.从胎盘中分离间充质干细胞的方法，该方法包括以下步骤：(a)取胎盘小叶，用PBS缓冲液充分冲洗，以去除胎盘中残留的血液；(b)将胎盘小叶剪成块状，加入含有组织消化酶的PBS缓冲液，再在37℃孵育10~20分钟消化；(c)将组织块用铜网过滤，研磨以促使过滤；(d)将收集的过滤液离心，分离单个核细胞，再用MSC培养基悬浮所获得的细胞，然后在37℃、5%CO₂培养箱中培养；(e)待散在细胞形成克隆后，挑取各克隆细胞，用MSC培养基分别培养，待细胞融合后，用胰酶消化传代，即得胎盘间充质干细胞；(f)针对步骤(e)所得胎盘间充质干细胞，检测以下项目的至少一项：细胞活性、HLA‑ABC/DR配型；(g)将步骤(e)所得传代后的胎盘间充质干细胞于液氮中冻存；(h)建立包含以上信息的胎盘干细胞的数据库，并使该数据库与步骤(g)的冻存细胞进行关联，其中，在步骤(b)中，所述PBS缓冲液中包含0.02mg/mL dispase、0.05mg/mL胰酶、0.02mg/mL DNase I、0.05mg/mL胶原酶IV、0.2mg/mL透明质酸酶、0.2~0.5mg/mL谷氨酸钠和2~5mg/mL甘露糖。