[发明专利]一种土元抗菌肽分离及抗菌活性研究方法

摘要

本发明公开了一种土元抗菌肽分离及抗菌活性研究方法，包括以下步骤步骤一、供试菌株制备；步骤二、土元抗菌肽粗提液的提取制备；步骤三、抗菌活力的测定；步骤四、结合药剂的相对抑制率A＝(B－C)/B×100％，评价供土元抗菌肽粗提物对番茄灰霉病菌的抑制作用，其中A为相对抑制率，B为对照菌落平均直径，C为处理组菌落的平均直径。本发明通过简易的实验方法，得出土元抗菌肽粗提物对番茄灰霉病菌具有较明细的抑制作用，方法较为完善、可靠，参考数据准确，有效解决了现有技术的不足。

主权项

一种土元抗菌肽分离及抗菌活性研究方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、供试菌株制备，菌株采用番茄灰霉病病菌，首先将长有灰色霉层的番茄病果实表面用无菌水冲洗，于病变交界处切取3mm×3mm的方块，然后置于PDA平板培养基上于25℃培养箱中培养；于发病严重果实上挑取灰色霉层少量，置于PDA平板培养基上，于25℃培养箱中培养；将25℃下分离培养1‑2天后的病原菌挑取单菌丝，纯化2‑3次后，转接于PDA斜面培养基中于4℃冰箱中保存备用；步骤二、土元抗菌肽粗提液的提取制备，200g干土元用水浸泡30min，洗净沥干，沸水浸泡10min，迅速用自来水冲凉、沥干；加入4℃预冷的0.5mol/L乙酸溶液800mL匀浆，匀浆液于4℃条件下，搅拌提取液，提取液在4℃、15000r/min条件下离心40min，将上清液冷冻干燥，获得粗提物干物质放置于‑80℃低温冰箱中备用；步骤三、抗菌活力的测定，根据有效成份含量，分别配制成PDA平板，每处理5个重复；步骤一制备的供试菌株在PDA平板上25±1℃暗培养3天，用内径为4.5mm的打孔器打取菌塞备用，随机取一菌塞，反接于加药的PDA平板上，以不加药的PDA做对照，25±1℃暗培养，24h、48h后各测定1次菌落直径；步骤四、根据步骤三，结合药剂的相对抑制率A＝(B－C)/B×100％，评价供土元抗菌肽粗提物对番茄灰霉病菌的抑制作用，其中A为相对抑制率，B为对照菌落平均直径，C为处理组菌落的平均直径。