[发明专利]一种同时测定血浆中六种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法

摘要

本发明公开了一种同时测定血浆中六种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，以伊马替尼为内标，先用乙酸乙酯和叔丁基甲醚混合溶液对血浆中的药物进行萃取，再使用高效液相色谱分离样品，然后使用高分辨质谱平行反应监测模式进行药物靶向性检测，并使用药物二级碎片离子进行定量，实现同时对血浆中六种酪氨酸激酶抑制剂的浓度进行分析测定。该方法在具有快捷性的同时，能够获得纳克级检测限，兼具有极高的靶向性，表现出快速、通量高、灵敏度高、特异性强、精密度和准确度良好、稳定性好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点。本发明方法可用于临床上常用的抗肿瘤药物酪氨酸激酶抑制剂的血药浓度监测。

主权项

1.一种同时测定血浆中六种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，所述六种酪氨酸激酶抑制剂为阿帕替尼、克唑替尼、厄洛替尼、吉非替尼、埃克替尼和拉帕替尼，其特征在于，包括以下步骤：(1)取空白血浆，加入药物的甲醇溶液和内标伊马替尼的甲醇水溶液，分别制得各种药物的不同浓度的标准曲线血浆样本；采用由体积比为1:1的乙酸乙酯和叔丁基甲醚组成的混合溶液萃取所述标准曲线血浆样本中药物；再在高效液相色谱质谱联用仪上进样分析，记录色谱图和质谱图；并在色谱图中对药物及内标伊马替尼的特征性二级碎片离子进行提取，计算药物峰面积和内标峰面积的比值，然后以药物浓度为横坐标，以药物峰面积和内标峰面积的比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线；其中，所述药物是指所述六种酪氨酸激酶抑制剂，所述标准曲线血浆样本中各药物浓度范围如下：阿帕替尼0.02‑10ng/mL，克唑替尼0.10‑20.0ng/mL，厄洛替尼0.05‑10.0ng/mL，吉非替尼0.05‑10.0ng/mL，埃克替尼0.05‑10.0ng/mL，拉帕替尼2.0‑200.0ng/mL；所述标准曲线血浆样本中内标伊马替尼浓度为20.0ng/mL；(2)取患者血浆样本，加入内标伊马替尼的甲醇水溶液，使得内标浓度达到20ng/mL，得到患者待测血浆样本；采用由体积比为1:1的乙酸乙酯和叔丁基甲醚组成的混合溶液萃取所述患者待测血浆样本中药物；再在高效液相色谱质谱联用仪上进样分析，记录色谱图和质谱图；并在色谱图中对药物及内标的特征性二级碎片离子进行提取，计算药物峰面积和内标峰面积的比值，再根据标准曲线计算得到患者待测血浆样品中药物浓度；其中，液相色谱条件：Hypersil GOLD‑C18色谱柱，流动相为流动相A和流动相B，流动相梯度洗脱条件为：0‑0.5min，流动相B的体积分数为20％；0.5‑3.0min，流动相B的体积分数为20％‑95％；3.0‑6.0min，流动相B的体积分数为95％；6.0‑6.1min，流动相B的体积分数为95％‑20％；6.1‑8.0min，流动相B的体积分数为20％；流速为0.4mL/min，进样量5μL，柱温30℃，进样器内温度4℃，其中，流动相A为体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B为100％甲醇；质谱条件：离子源为HESI，喷雾电压3000V，毛细管温度350℃，鞘气和辅助气分别为45psi和10arb；正离子模式下以平行反应监测模式进行扫描，二级碎片扫描分辨率为17500；各药物和内标的碰撞解离能量分别为：阿帕替尼35％、克唑替尼21％、厄洛替尼37％、吉非替尼25％、埃克替尼35％、拉帕替尼35％、伊马替尼32％；各药物和内标的母离子/特征性二级碎片离子的检测离子对如下：阿帕替尼398.1975/212.0818、克唑替尼450.1258/260.1506、厄洛替尼394.1761/336.1343、吉非替尼447.1593/128.1070、埃克替尼392.1604/304.1081、拉帕替尼581.1420/458.1066、伊马替尼494.2662/394.1662。