[发明专利]一种氧化石墨烯/甲胎蛋白适体电化学传感器的制备方法

摘要

本发明公开一种氧化石墨烯/甲胎蛋白适体电化学传感器的制备方法，该方法是以羧基化氧化石墨烯为基底，通过碳二亚胺反应在基底上嫁接氨基化的甲胎蛋白适体链，然后将所得复合物修饰到电极上，并用牛血清蛋白封闭修饰电极上的非特异性吸附位点，由此便形成了氧化石墨烯/甲胎蛋白适体电化学传感界面。以该修饰电极为工作电极，采用阻抗法考察传感界面由不同浓度甲胎蛋白溶液所引起的阻抗信号的变化。与现有检测甲胎蛋白的方法相比，本发明采用甲胎蛋白适体对目标蛋白进行分析，不存在冗杂的多重标记操作和辐射、污染等危害，且具有灵敏度高、选择性好、制备简单、分析速度快、反应条件温和、制备成本低等优点。

主权项

1.一种采用电化学传感器检测甲胎蛋白的方法，该方法为非疾病诊断和治疗方法，其特征是，包括以下步骤：(1)采用电化学工作站的三电极体系进行检测，以结合了目标分析物的电化学传感器为工作电极，以银‑氯化银电极、铂丝电极为参比电极和对电极，交流阻抗测试参数设置：频率范围为0.05～100KHz，交流微扰振幅为5mV，极化电路选择开路电位；(2)将三电极浸没于含4～10mM铁氰化钾的PBS电解质溶液中进行交流阻抗测试，不同浓度甲胎蛋白溶液孵化的传感界面，其阻抗信号大小不同，据此绘制工作曲线；(3)采用以上方法对实际样品中的甲胎蛋白进行分析检测；其中，所述电化学传感器是通过以下方法制备得到的：以羧基化氧化石墨烯为基底，通过碳二亚胺反应在基底上嫁接氨基化甲胎蛋白适体，得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物；然后以该氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物修饰玻碳电极，并用牛血清蛋白封闭修饰后玻碳电极上的非特异性吸附位点，得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物‑电极；具体方法包括：将3～10μL氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物分散液滴涂于玻碳电极表面，晾干后，将4～8μL质量分数为0.5％～1.5％的牛血清蛋白滴涂于修饰后的玻碳电极表面，并孵化15～60min，以封闭传感界面的非特异性结合位点，即得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物‑电极；再将氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物‑电极浸于不同浓度的甲胎蛋白中孵化；孵化结束后，取出电极并洗涤，得到捕获有目标分析物甲胎蛋白的氧化石墨烯/甲胎蛋白适体电化学传感器；其中，氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物的制备方法包括以下步骤：(1)将2～6mg氧化石墨烯于1～3ml去离子水中超声分散1～1.5h，得到分散均匀的氧化石墨烯悬乳液；(2)向获得的氧化石墨烯悬乳液中加入0.3～0.6g NaOH和0.2～0.5g氯乙酸，并超声处理10～12h，以增加氧化石墨烯上的羧基；(3)将经过羧基化的氧化石墨烯离心洗涤后，加入1～4ml0.3M的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和1～3ml 0.2M的N‑羟基琥珀酰亚胺，并进行超声处理1～1.5h，以活化氧化石墨烯上的羧基；(4)将经过活化的氧化石墨烯离心洗涤后，加入0.5～1ml浓度为30～250μg/ml的氨基化甲胎蛋白适体溶液孵化20～40min，以将甲胎蛋白适体链嫁接到氧化石墨烯表面；(5)将步骤(4)中获得的氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物进行离心洗涤，以除去未结合的甲胎蛋白适体，然后将离心洗涤后所得复合物用PBS溶解，并超声分散得到均匀分散液，即得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物分散液。