[发明专利]一种氧化石墨烯/甲胎蛋白适体电化学传感器的制备方法

权利要求书

1.一种采用电化学传感器检测甲胎蛋白的方法，该方法为非疾病诊断和治疗方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)采用电化学工作站的三电极体系进行检测，以结合了目标分析物的电化学传感器为工作电极，以银-氯化银电极、铂丝电极为参比电极和对电极，交流阻抗测试参数设置：频率范围为0.05～100KHz，交流微扰振幅为5mV，极化电路选择开路电位；

(2)将三电极浸没于含4～10mM铁氰化钾的PBS电解质溶液中进行交流阻抗测试，不同浓度甲胎蛋白溶液孵化的传感界面，其阻抗信号大小不同，据此绘制工作曲线；

(3)采用以上方法对实际样品中的甲胎蛋白进行分析检测；

其中，所述电化学传感器是通过以下方法制备得到的：以羧基化氧化石墨烯为基底，通过碳二亚胺反应在基底上嫁接氨基化甲胎蛋白适体，得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物；

然后以该氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物修饰玻碳电极，并用牛血清蛋白封闭修饰后玻碳电极上的非特异性吸附位点，得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物-电极；具体方法包括：将3～10μL氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物分散液滴涂于玻碳电极表面，晾干后，将4～8μL质量分数为0.5％～1.5％的牛血清蛋白滴涂于修饰后的玻碳电极表面，并孵化15～60min，以封闭传感界面的非特异性结合位点，即得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物-电极；

再将氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物-电极浸于不同浓度的甲胎蛋白中孵化；孵化结束后，取出电极并洗涤，得到捕获有目标分析物甲胎蛋白的氧化石墨烯/甲胎蛋白适体电化学传感器；

其中，氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物的制备方法包括以下步骤：

(1)将2～6mg氧化石墨烯于1～3ml去离子水中超声分散1～1.5h，得到分散均匀的氧化石墨烯悬乳液；

(2)向获得的氧化石墨烯悬乳液中加入0.3～0.6g NaOH和0.2～0.5g氯乙酸，并超声处理10～12h，以增加氧化石墨烯上的羧基；

(3)将经过羧基化的氧化石墨烯离心洗涤后，加入1～4ml0.3M的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1～3ml 0.2M的N-羟基琥珀酰亚胺，并进行超声处理1～1.5h，以活化氧化石墨烯上的羧基；

(4)将经过活化的氧化石墨烯离心洗涤后，加入0.5～1ml浓度为30～250μg/ml的氨基化甲胎蛋白适体溶液孵化20～40min，以将甲胎蛋白适体链嫁接到氧化石墨烯表面；

(5)将步骤(4)中获得的氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物进行离心洗涤，以除去未结合的甲胎蛋白适体，然后将离心洗涤后所得复合物用PBS溶解，并超声分散得到均匀分散液，即得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物分散液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是，在修饰玻碳电极之前，对玻碳电极进行预处理，预处理方法为：将玻碳电极依次用粒径为0.3μm、0.05μm的三氧化二铝抛光粉处理，并先后用乙醇、去离子水将玻碳电极超声清洗干净。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是，玻碳电极的直径为3mm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是，将封闭后的玻碳电极浸没于1～2mL含0.00001～100ng/mL甲胎蛋白的PBS溶液中孵化15～60min。