[发明专利]一种高灵敏表达绿色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法和应用有效
| 申请号： | 201710323114.3 | 申请日： | 2017-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN106995824B | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 贾凡;徐富强;徐小琴;缪欢 | 申请（专利权）人： | 中国科学院武汉物理与数学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N7/01;C12Q1/70;G01N21/64;G01N1/28;G01N1/36;G01N1/42;C12R1/93 |
| 代理公司： | 42001 武汉宇晨专利事务所 | 代理人： | 龚莹莹 |
| 地址： | 430071 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高灵敏表达绿色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法和应用，包括（1）制备高灵敏表达绿色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒；（2）在标记神经环路中的应用，该平台成功制备高灵敏表达绿色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒。本发明成功获得高灵敏表达绿色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒，在神经环路标记、药物筛选平台的建立、药物抑制病毒作用机制、病毒疫苗和诊断试剂的研发、动物模型的建立、病毒复制和致病机制的分析等方面具有广泛的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 灵敏 表达 绿色 荧光 蛋白 逆向 神经 环路 重组 狂犬病毒 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种高灵敏表达绿色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法，包括下述步骤：/n1)具备高效表达绿色荧光蛋白能力的克隆：以pCDNA3.1(+)为载体，采用同源重组的方式将SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5顺次插入到载体，获得克隆命名为pCDNA3.1(+)-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA；/n2)构建高灵敏度表达绿色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒：将SEQ ID NO.16插入到经过MluI和ClaI双切的pCDNA3.1(+)-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA，从而获得质粒pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA；将SEQ ID NO.19插入到经过AscI单切的pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA，从而获得质粒pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA-right arm；将所得的质粒转染BHK21细胞后感染伪狂犬病毒Bartha株，收集细胞培养基上清；纯化后即获得高灵敏度表达绿色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒。/n
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