[发明专利]一种HBV pgRNA的实时荧光定量RT-PCR检测引物组、探针组、试剂盒及方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及病毒检测领域，更具体涉及一种HBV pgRNA的实时荧光定量RT‑PCR检测引物组、探针组、试剂盒及方法。所述的检测引物组和检测探针组包括：引物组1和探针组1；或引物组2和探针组2。而本发明提供的Stoffel片段和Tfl DNA聚合酶的双聚合酶的扩增方法可以实现对常规检测方法难以正常扩增的疑难样品的扩增，因此具有更高的灵敏性的正确性。

主权项

1.一种用于检测HBV pgRNA的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括检测引物组和检测探针组，还包括酶系；所述的检测引物组和检测探针组包括：引物组1和探针组1；或引物组2和探针组2；所述的引物组1包括以下4条引物：引物F1：其核苷酸序列为5’‑TGG TGT CTT TTG GAG TGT GGA T‑3’；引物R1：其核苷酸序列为5’‑CCA CCT TAT GTG TCC AAG GAA TAC T‑3’；引物F2：其核苷酸序列为5’‑TTC ACC TCA CCA TAC GGC ACT CAG GC‑3’；和引物R2：其核苷酸序列为5’‑ATG AAT GTC AGG AAA AGA AGG AGT TTG CC‑3’(SEQ ID NO：4)；所述的探针组1包括以下两条探针：探针P1：其核苷酸序列为5’‑CGC ACT CCT CCT GCA TAT AGA CCA TCA AA‑3’(SEQ ID NO：5)，其5’端标记有荧光基团，所述的荧光基团为FAM、HEX、VIC、CY5和TET中的一种；其3’端标记有的淬灭基团，所述的淬灭基团为TAMRA、MGB和BHQ中的一种，和探针P2：5’‑TCT CAA TCG CCG CGT CGC A‑3’(SEQ ID NO：6)，其5’端标记有荧光基团，所述的荧光基团为FAM、HEX、VIC、CY5和TET中的一种；其3’端标记有的淬灭基团，所述的淬灭基团为TAMRA、MGB和BHQ中的一种；探针P1和探针P2应具有相同的荧光基团；所述的引物组2包括以下4条引物：引物F3：其核苷酸序列为5’‑TTT GGT GTC TTT TGG AGT GTG GA‑3’；引物R3：其核苷酸序列为5’‑CTT ATG TGT CCA AGG AAT ACT AA‑3’；引物F4：其核苷酸序列为5’‑GTT CAC CTC ACC ATA CGG CAC TCA GG‑3’；和引物R4：其核苷酸序列为5’‑TGA ATG TCA GGA AAA GAA GGA GTT TGC CA‑3’(SEQ ID NO：10)；所述的探针组2包括以下两条探针：探针P3：其核苷酸序列为5’‑TTC GCA CTC CTC CTG CAT ATA GAC CAT CA‑3’(SEQ ID NO：11)，其5’端标记有荧光基团，所述的荧光基团为FAM、HEX、VIC、CY5和TET中的一种；其3’端标记有的淬灭基团，所述的淬灭基团为TAMRA、MGB和BHQ中的一种，和探针P4：其核苷酸序列为5’‑CTC AAT CGC CGC GTC GCA‑3’(SEQ ID NO：12)，其5’端标记有荧光基团，所述的荧光基团为FAM、HEX、VIC、CY5和TET中的一种；其3’端标记有的淬灭基团，所述的淬灭基团为TAMRA、MGB和BHQ中的一种；探针P3和探针P4应具有相同的荧光基团；所述的酶系包括：(1)Tfl DNA聚合酶；(2)MMLV反转录酶；(3)Stoffel片段。