[发明专利]一种克氏原螯虾染色体的制备方法

摘要

本本发明属于动物细胞学实验技术领域，具体涉及一种克氏原螯虾染色体的制备方法。其步骤为用植物血凝素PHA和秋水仙素分别注射处理克氏原螯虾虾体后，取虾的触角腺，置于生理盐水中漂洗，然后将组织剪碎成泥状，通过离心方法获得细胞悬液；用0.75％KCl溶液和固定液‑1分别进行低渗处理和预固定；然后用31固定液‑1和固定液‑2分别对细胞进行固定；将预冷的载玻片斜放，用滴管吸取适量的细胞悬液，垂直快而有力的喷到载玻片上，酒精灯火焰上快速烤2‑3s，空气下晾干；用吉姆萨染色液对附有染色体的玻片进行染色；显微镜下观察和拍照。本发明的染色体分散较好，形态可辨，可数的染色体分裂相。

主权项

一种克氏原螯虾染色体制备方法，其特征包括以下步骤：(1)前期处理：按克氏原螯虾体重6ug/g的剂量向肌肉内注射植物血凝素(PHA)，间隔12h后按同样剂量注射第二次，间隔3h后按照5ug/g虾体重的剂量注射1mg/mL的秋水仙素，注射秋水仙素4h后取样；(2)用离心法制备细胞：取克氏原螯虾的触角腺组织，置于生理盐水中漂洗，然后转移到盛有500uL生理盐水的1.5mL离心管中，用小剪子将组织剪碎成泥状，全部移入10mL试管，在500r/min下离心3min，离心后取上清液，在1000r/min下离心10min，弃上清液；(3)低渗、预固定：用滴管将细胞吹散，缓慢加入0.75％KCl溶液至5mL，室温下放置30min后加1mL的固定液‑1，在1000r/min下离心10min，弃去上清液，留少许上清液，将细胞吹散；(4)固定：加入5mL固定液‑1固定1.5h，中间更换3次固定液‑1，每次在1000r/min下离心10min，最后一次留少许上清液，将细胞缓慢吹散后，加入适量的固定液‑2，将细胞混合均匀，30min后制片；(5)喷片：将预冷的载玻片斜放，用滴管吸取适量的细胞悬液，垂直快而有力的喷到载玻片上，在酒精灯火焰上快速烤2‑3s后，在空气下干燥；(6)染色：采用瑞士‑姬姆萨染色套组，该姬姆萨染色套组分A液和B液，配制时按A液：B液的体积比为1：2进行混合，对附着有染色体的玻片进行染色；(7)在显微镜下观察和拍照；其中：步骤(2)中的生理盐水组分为：NaCl 7.5g/L，CaCl2 0.2g/L，KCl 0.2g/L，NaHCO2 0.02g/L。步骤(4)中的固定液‑1为甲醇和冰醋酸按3:1体积比配制，固定液‑2为甲醇和冰醋酸按1:1体积比进行配制。