[发明专利]基于壳聚糖-铂模拟氧化酶的酸性磷酸酶测定方法

摘要

本发明公开一种基于壳聚糖‑铂模拟氧化酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征是利用酸性磷酸酶水解抗坏血酸磷酸酯生成抗坏血酸，影响壳聚糖‑铂模拟氧化酶/3，3’，5，5’‑四甲基联苯胺盐酸盐催化显色反应体系，结合溶液颜色和紫外吸收光谱特征的变化，直接用于酸性磷酸酶及其抑制剂含量的测定。在0.25~2.5 U/L范围内，吸光度变化值△A₄₅₀与酸性磷酸酶浓度呈线性关系，检测限为0.0161 U/L。本发明操作简便、灵敏度高，能够作为分析方法应用于环境及生命科学体系中酸性磷酸酶及其抑制剂含量的测定。

主权项

1.一种基于壳聚糖‑铂模拟氧化酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征是在抗坏血酸磷酸酯和酸性磷酸酶反应产物中加入3，3’，5，5’‑四甲基联苯胺盐酸盐溶液和壳聚糖‑铂模拟氧化酶溶液，反应后加入硫酸溶液终止反应，根据溶液颜色和紫外吸收光谱特征的变化，用于酸性磷酸酶含量的测定；所使用的壳聚糖‑铂模拟氧化酶是用壳聚糖作为稳定剂，硼氢化钠还原氯铂酸得到，具体合成步骤如下：称取0.1 g壳聚糖溶解于50 mL浓度为1% v/v的醋酸中，搅拌15分钟使壳聚糖完全溶解即得到浓度为0.002 g/mL的壳聚糖溶液，将2 mL浓度为10 mmol/L氯铂酸加入到47 mL浓度为0.002 g/mL壳聚糖溶液中，搅拌30分钟，然后逐滴加入1 mL浓度为0.2 mol/L新配制的硼氢化钠溶液并在5分钟之内加完，置于暗处搅拌90分钟，得到壳聚糖‑铂模拟氧化酶，所得产物避光冷藏保存。