[发明专利]基于壳聚糖-铂模拟氧化酶的酸性磷酸酶测定方法

权利要求书

1.一种基于壳聚糖-铂模拟氧化酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征是在抗坏血酸磷酸酯和酸性磷酸酶反应产物中加入3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐溶液和壳聚糖-铂模拟氧化酶溶液，反应后加入硫酸溶液终止反应，根据溶液颜色和紫外吸收光谱特征的变化，用于酸性磷酸酶含量的测定；所使用的壳聚糖-铂模拟氧化酶是用壳聚糖作为稳定剂，硼氢化钠还原氯铂酸得到，具体合成步骤如下：称取0.1 g壳聚糖溶解于50 mL浓度为1% v/v的醋酸中，搅拌15分钟使壳聚糖完全溶解即得到浓度为0.002 g/mL的壳聚糖溶液，将2 mL浓度为10 mmol/L氯铂酸加入到47 mL浓度为0.002 g/mL壳聚糖溶液中，搅拌30分钟，然后逐滴加入1 mL浓度为0.2 mol/L新配制的硼氢化钠溶液并在5分钟之内加完，置于暗处搅拌90分钟，得到壳聚糖-铂模拟氧化酶，所得产物避光冷藏保存。

2.根据权利要求1所述的基于壳聚糖-铂模拟氧化酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征是将50 μL浓度为4 mmol/L的抗坏血酸磷酸酯和50 μL不同浓度的酸性磷酸酶加入到200 μLpH为 5，浓度为50 mmol/L的醋酸盐缓冲液中，混合均匀后在37℃下反应30分钟，然后依次加入632.5 μL pH为 5，浓度为50 mmol/L的醋酸盐缓冲液、50 μL浓度为3 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐溶液和17.5 μL壳聚糖-铂模拟氧化酶溶液，混合均匀后再在37℃下反应5分钟，加入200 μL浓度为2 mol/L的硫酸溶液终止反应，测定溶液的吸光度值A₄₅₀。

3.根据权利要求1或2所述的基于壳聚糖-铂模拟氧化酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征是在0.25 ~ 2.5 U/L范围内，吸光度变化值△A₄₅₀与酸性磷酸酶浓度呈线性关系，检测限为0.0161 U/L。

4.一种基于壳聚糖-铂模拟氧化酶的测定人血清酸性磷酸酶的方法，其特征是包括如下步骤：将50 μL浓度为4 mmol/L的抗坏血酸磷酸酯和50 μL人血清加入到200 μL pH为 5，浓度为50 mmol/L的醋酸盐缓冲液中，混合均匀后在37℃下反应30分钟，依次将632.5 μLpH为 5，浓度为50 mmol/L的醋酸盐缓冲液、50 μL浓度为3 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐溶液和17.5 μL壳聚糖-铂模拟氧化酶溶液加入到上述反应液中，混合均匀后再在37℃下反应5分钟，加入200 μL浓度为2 mol/L的硫酸溶液终止反应，测定溶液的吸光度值A₄₅₀，根据酸性磷酸酶标准曲线计算人血清中的碱性磷酸酶含量；所使用的壳聚糖-铂模拟氧化酶是用壳聚糖作为稳定剂，硼氢化钠还原氯铂酸得到，具体合成步骤如下：称取0.1g壳聚糖溶解于50 mL浓度为1 %v/v 的醋酸中，搅拌15分钟使壳聚糖完全溶解即得到浓度为0.002 g/mL的壳聚糖溶液，将2 mL浓度为10 mmol/L氯铂酸加入到47 mL浓度为0.002 g/mL壳聚糖溶液中，搅拌30分钟，然后逐滴加入1 mL浓度为0.2 mol/L新配制的硼氢化钠溶液并在5分钟之内加完，置于暗处搅拌90分钟，得到壳聚糖-铂模拟氧化酶。

5.根据权利要求4所述的基于壳聚糖-铂模拟氧化酶的测定人血清酸性磷酸酶的方法，其特征是人血清样品测定的回收率为97.4%~107.8%，相对标准偏差为2.4~6.4%。