[发明专利]一种从厌氧氨氧化污泥中提取和测定亚铁血红素的方法有效
| 申请号： | 201710278495.8 | 申请日： | 2017-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN107356567B | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 孟凡刚;孟雅冰;周忠波 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N1/34 |
| 代理公司： | 44102 广州粤高专利商标代理有限公司 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种从厌氧氨氧化污泥中提取和测定亚铁血红素的方法，包括以下步骤：S1.原位获取生物污泥样品，将其低温中高速离心，去除上清液，得到无杂质污泥；S2.用磷酸盐缓冲溶液清洗污泥，离心得到浓缩的菌体，备用；S3.取上述菌体置于磷酸盐缓冲溶液，进行细胞超声破碎；离心后过滤，得到的悬浮液体即为亚铁血红素溶液；S4.测定亚铁血红素溶液荧光强度。本发明提供的从厌氧氨氧化污泥中提取和测定亚铁血红素的方法能够成功提取亚铁血红素并准确测定污泥中的亚铁血红素含量，对研究厌氧氨氧化污泥生物活性的调控发挥重要作用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 厌氧氨 氧化 污泥 提取 测定 亚铁 血红素 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从厌氧氨氧化污泥中提取和测定亚铁血红素的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.原位获取生物污泥样品，将其在0～4℃，3000～5000g离心力条件下作用10～30min，去除上清液得到无杂质污泥；S2.将S1所得无杂质污泥置于磷酸盐缓冲溶液中震荡均匀，在0～4℃，3000～5000g离心力条件下作用10～30min后弃去上清液，重复操作，直至得到的上清液为无色，弃去上清液得到菌体；S3.取S2所得菌体置于磷酸盐缓冲溶液中，在800～900w功率下进行细胞超声破碎，然后在0～4℃，10000～17000g离心力条件下作用10～30min后过滤，得到的悬浮液体即为亚铁血红素溶液；S4.测定亚铁血红素溶液荧光强度；步骤S4所述测定亚铁血红素溶液荧光强度包括如下步骤：S41.取步骤S3得到的亚铁血红素溶液与饱和草酸溶液混合，体积比为1:10～1:12，震荡均匀；S42.将S41获得的混合溶液在100～110℃下加热20～30min，冷却备用；S43.使用不含有亚铁血红素的样品作为空白，采用三维荧光光谱仪测定激发波长为240～500nm及发射波长为500～700nm处的荧光强度。/n
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