[发明专利]一种能使稻属植株快速脱病脱毒的扦插育苗方法

摘要

本发明涉及一种能使稻属植株快速脱病脱毒的扦插育苗方法，属植物脱毒技术领域。该能使稻属植株快速脱病脱毒扦插育苗方法包括：野外取材，茎秆脱病脱毒灭菌处理，茎秆扦插的预处理，茎秆扦插，茎秆的复壮培养步骤。本发明利用植物脱病脱毒技术，有效解决了稻属茎秆扦插过程中的污染问题，且扦插的茎秆成活率较高，扦插苗生长旺盛长势较好，为重要杂交材料的复壮快繁以及野生稻优良种质资源的保存提供了有效的手段。该方法简单易行、成本低、扦插成活的稻属植株长势好，基本无病虫害发生；且扦插培苗的周期短，一般为1‑2个月即可进行下一步移栽，不受季节等环境因素影响，能大面积推广和应用。还能应用于保存和快速繁殖一些稀有的稻属品种。

主权项

1.一种能使稻属植株快速脱病脱毒的扦插育苗方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：a.野外取材：在晴天早晨露水未干时用剪刀剪取带病或生长状态瘦弱的稻属植株上的带节茎秆，取材后立即放入盛有清水的桶中，以避免茎秆失水；再按照不同株系用保鲜膜包裹茎秆，置于冰袋中保鲜带回实验室；b.茎秆脱病脱毒灭菌处理：带回实验室的稻属茎秆在流动的自来水下冲洗10分钟，将表面的泥浆和污垢彻底冲洗干净后，用体积百分比为75％的酒精棉球擦拭茎秆，并用剪刀将茎秆剪成5cm或7cm的段，茎秆生物学下方剪成斜口，生物学上段剪成平口，每段有1个结节；在无菌操作台用镊子剥离表面带病或发霉叶鞘，保留无病叶鞘，用体积百分比为75％的酒精浸泡20秒，表面灭活后用无菌蒸馏水冲洗5次或6次；用体积百分比为6％的次氯酸钠溶液表面灭活3分钟，摇动灭菌瓶，最后用无菌蒸馏水清洗10次或12次；c.茎秆扦插的预处理：在无菌操作台中将用无菌蒸馏水配制好的质量体积比为3％的琼脂糖倒入培养瓶中，琼脂糖厚度3cm，待琼脂糖凝固后，将灭菌处理好的茎秆段斜口端向下插入琼脂糖中固定，根据茎秆段的长度在培养瓶中加入深度为3cm已灭菌的自来水，用封口膜封口后置于28℃，相对湿度60％的暗培养箱中培养；待茎秆处长出1cm或2cm新芽后在无菌操作台中将培养瓶中的自来水倒掉，并用已灭菌的自来水清洗培养瓶中茎秆3次，清洗后在培养瓶中再加入深度为1cm的灭菌自来水，封口膜封口后放入28℃，光照强度1600 Lux，光照时间为每天6:00‑22:00时，空气相对湿度60％的光照培养箱中培养2天；d.茎秆的扦插：在无菌操作台中用灭菌的镊子取出已出芽的茎秆插入盛有土的组培瓶中，茎秆插入土的深度为茎节刚好被土覆盖，加土的量占整个组培瓶的1/2，并在上面铺一层厚度为5mm珍珠岩；茎秆扦插后在组培瓶中加入10mL已灭菌的自来水，用封口膜封口后放入28℃，空气相对湿度60％，光照强度2000 Lux，光照时间为每天6:00‑22:00时的培养箱中培养，适时喷水，保证土壤湿润；上述所用自来水、组培瓶、土以及珍珠岩均经121℃，20分钟灭菌；e.茎秆的复壮培养：茎秆扦插培养4‑6天，待新幼芽长至5cm时每周加入pH5.8的3‑5mL1/4 N6液体培养基；待新苗长至10cm时开始炼苗，将封口的封口膜更换为保鲜膜，在组培瓶中加入灭菌自来水，加入自来水的量为超过土壤表面1cm，炼苗处理的第1天至第5天，每天用大头针在封口的保鲜膜上刺出8‑15个小孔，第6天将小苗移到温室，揭开保鲜膜，按常规水肥管理进行培养。